RNA干扰技术及其在妇科肿瘤领域的应用进展.pdfVIP

中国临床保健杂志 2008年 12月第 11卷第6期 ChinJClinHeahhc，December2008，V0l-上NO．6 · 663 · · 综述 · RNA干扰技术及其在妇科肿瘤领域的应用进展 李大可 (南京医科大学第一附属医院妇产科，南京 210036) [中图分类号]R730．5 [文献标识码]A [文章编号]1672—6790(2008)06-0663-03 RNA干扰技术 (RNAi)现象最早在 1998年 由 AGO一2、VIG和dFXR以及Dmp68等 ’，实验证实 Fire 首次发现并命名，是通过导入特异序列的 这些成分是RISC的一部分且为 RNAi所必需。即 dsRNA引起基因沉默的方法。由于 RNAi抑制基因 siRNA和AGO-2等蛋白中的一个或多个结合而形成 表达具有特异性和高效性，同时伴随近年来合成 RISC。siRNA的反义链与靶 mRNA以Watson．Crick dsRNA技术上的改进，RNAi已成为研究基因功能， 碱基配对原则相结合，然后剪切mRNA为21—23nt的 肿瘤基因治疗 ，病毒感染基因治疗的新方法。 小片段 。实验发现靶 mRNA上剪切点位于 siRNA 1 RNAi的分子机制 覆盖区域中心附近，具体定位在与 siRNA中反义链 经历了大量的实验观察，研究者正迅速地破译 互补的第一个核苷酸下游 11或 12个核苷酸处 。 RNAi的真正机制。通过生化和遗传学研究，产生了 在剪切过程 中siRNA的结构起了重要作用，具有典 现有的RNAi作用机制模型，包括起始阶段 、效应阶 型结构 的 siRNA较平末端 siRNA更能有效引起 段和倍增阶段。 RNAi作用，尤其是 3端外悬的第 2个核苷酸影响 1．1 起始阶段 在细胞质中，内源性或外源性长 siRNA对靶mRNA的剪切作用，即使一个碱基错配 dsRNA与 Dicer酶的dsRNA结合区结合形成 dicer． 也会使 RNAi作用降低 2～4倍H’。 dsRNA复合物，在 Dicer酶的RNase活性作用下将 1．3 倍增阶段 以往实验发现仅需少量 siRNA即 长dsRNA剪切成21．23nt的RNA产物即siRNA 。 可引起强烈同源基因表达抑制，因此众多学者推测 1．2 效应阶段 Elbashir等 在果蝇体外系统中 在 RNAi过程中存在倍增放大机制 。有人认为在前 加入合成 2l一23nt的siRNA，使之能有效降解 同源 述的mRNA剪切过程 中产生的21．23nt片段可能会 mRNA，而当 siRNA浓度增加到一定阈值时，mRNA 作为新的siRNA而继续参与 RNAi过程 ，从而使干 降解程度不再继续增加，提示在果蝇裂解液 中含有 扰作用放大。然而，Maaens等 在 网状原虫的 一 定数量 RNAi所需蛋 白因子。进一步研究得知 RNAi实验 中分离出3个 RdRp(RNA指导的 RNA RNAi所需蛋白因子是一种复合物，被称为 RNA诱 聚合酶)同源体即RrpA、RrpB、DosA，其中RrpA为 导的沉默复合体 (RNA--inducedsilencingcomplex， RNAi所必需的酶 ，另外两个功能 尚不清楚。在网状 RISC)。RISC是一种核糖核蛋 白，包含有 RNA和蛋 原虫体 内若敲除RrpA则无法检测到 siRNA，但在体 白成分。其中的RNA就是 siRNA，其蛋 白成分包括 外系统中仍可检测到，但量非常少。这些少量的 siRNA可能是在 dsRNase作用下产生 的，故推测 作者简介：李大可 (1970一)，男，安徽颖上人，医学博士，主 RNAi过程 中