RNA干扰的实现及应用前景.pdfVIP

2008年11月第46卷第33期 · 综 述 · RNA干扰的实现及应用前景 张淑雅 李勇慧z (1．洛阳市卫生学校，河南洛阳471001；2．洛阳师范学院，河南洛阳471000) 摘【要】RNA干扰现象是生物界的一种保守行为，能特异性地抑制同源基因表达 ，具有维持基因组稳定性和抵抗病毒人侵的 作用。RNA干扰现象已在植物、真菌、低等无脊椎动物和哺乳动物等多种生物体内发现，其可能是生物界一种古老而且进化 上高度保守的重要现象。RNA干扰是生物体适应外界环境、基因表达调控、抵抗外源病毒RNA侵染而保护基因组的重要机 制。本文综述了RNA干扰的原理、实现方法、应用等几个方面的研究，并对 RNA干扰在基因治疗上的应用前景进行了展望。 关【键词1RNA干扰；RNA聚合酶Ⅲ；Dicer [中图分类号lR394 文【献标识码】A [文章编号】1673—970I(2008)33—53—02 1998年华盛顿卡耐基研究院的Andrew1|l将体外转录得列的 单链 RNA纯化后注射线虫时发现，基因抑制效应变得十分微 精 Z一{臻擗觚抽簟 弱，而经过纯化的双链 RNA却正好相反，能够高效特异性阻断 1ltl z #¨t纂端 警缱憾# dl, 相应基因的表达。该小组将这一现象称为RNA干扰 (RNAin— 3 terference，简称RNAio随后的研究中发现，RNAi现象广泛存在 鬣 ； m 一 “ 于水蛭、果蝇、斑马鱼 、爪蟾及小鼠等多种动物种中，这种存在揭 ～ l ^抻 · { 擀髓 嫦鬻蠹摊母 瀵霹群髓 示了RNAi很可能是出现于生命进化的早期阶段。随着研究的不 断深入 ，RNAi的作用机制正在逐步被阐明，而同时作为功能基 … 。 i 因组研究领域中的有利工具，RNAi也越来越为研究者所重视。 越 s 一 舶 n 撼 ； 越 醚 ÷ 。 ； 1 RNAi的原理 RNAi是一种序列特异性的，由双链RNA基因所诱导的基 图1 RNA干扰 的机制 因沉默现象 。研究表明，针对内含子和启动子的dsRNA并不起 快，24小时左右即可完成。其原理是分别合成互补的两条带有 作用，RNAi作用是发生在转录后，故称为转录后基因沉默。目前 17启动子(也有用其他启动子的)的DNA模板，各 自在体外转录 对RNAi的作用机制尚不清楚，通常认为四，dsRNA由核酸内切酶 为单链RNA，最后再将两条RNA链退火后形成双链RNA。 切割成 21 23bp的小干扰 RNA，siRNA再与体内一些酶 (包括 2．3 酶消化法 内切酶、外切酶、螺旋酶)结合形成 RNA诱导的沉默复合物 siRNA在靶序列的设计中存在一个难题，即如何找到抑制效 RISC，RISC再特异性地与mRNA的同源区结合，通过酶的作用 率最高的位点。由于即使是非常临近的两个靶序列，其抑制效率 使mRNA降解，而产生基因沉默。靶mRNA被破坏后，RISC还可 也会有很大区别。因此，如果想得到一个非常理想的靶序列需要 以再作用于其他