甘薯叶绿体rbcL基因的克隆与序列分析.pdfVIP

882 植物生理学通讯 第44卷 第5期，2008年 l0月 甘薯叶绿体rbcL基因的克隆与序列分析 王玉华 ，吴忠义。，贾敬芬 ，张秀海 ，黄丛林 ， 西北大学生命科学学院，西安710069；北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心，北京100097 提要：根据烟草、水稻和菠菜叶绿体的全基因组序列设计引物，以甘薯的叶绿体基因组DNA为模板，PCR扩增包含甘薯叶 绿体rbcL完整基因(GenBank登录号为AY942199)在内的一段序列。序列分析表明：此片段的全长为 1627bp，包括 1443 bp的编码 区序列在 内，推测编码480个氨基酸，同时构建了此片段的限制性酶切图谱。相似性比较显示，此基因编码 区序 列与烟草、菠菜、小麦、水稻、玉米、矮牵牛、紫花苜蓿、拟南芥、莨菪、葡萄以及甜菜的rbcL基因核苷酸的同源性为 85％—98％，氨基酸的同源性为 92％—95％。 关键词：甘薯；叶绿体基因；cL基因；序列分析 CloningandSequenceAnalysesoftherbcLGenefrom ChloroplastofSweet Potato[Ipomoeabatatas(L．)Lam．] WANGYu—Hua，W UZhong—Yi，JIA Jing—Fen，ZHANG Xiu—Hai，HUANG Cong—Lin CollegeofLifeSciences，NorthwestUniversity，Xi’an710069,China；BeijingAgro—BiotechnologyResearchCenter,Beijing AcademyofAgriculturalandForestrySciences，Beijing10009ZChina Abstract：Apairofprimersusedinamplifyingchloroplastfragmentofsweetpotatowasdesignedaccordingto thecorrespondingsequencesintobacco，riceandspinachchloroplastgenomes．TherfagmentcontainingrbcL genewasclonedrfom sweetpotatochloroplastgenome．Sequencinganalysisindicatedthatthisrfagmentwas 1627basepairs(bp)insize．ThecompleteopenreadingflameofIpomoeabatatasrbcLgeneis1443bp encodingapolypeptideof480aminoacids．Therestrictionmapofthisclonedrfagmentwasalsoestablished． TheBLASTresultsshowedthatthehomologiesofhtisgenewiht tobacco，spinach，wheat，rice，maize，petunia， alfalfa，Arabidopsisthaliana，belladonna，grapeandsugarbeetwererfom 85％ to98％，andthehomologous aminoacidsequenceswererfom 92％ to95％． Keywords：sweetpotato[Ipomoeabatatas(L．)Lam．】；chloroplastgene；rbcLgene；sequenceanalyses 叶绿体基因工程作为一项转基因技术，具有核 因组中编码核酮糖 1，5一二磷酸羧化酶 ／加氧酶 转化不具备的独特优点：高效表达 目的基因，环境 (ribulose-1，5一bisphosphatecarboxy1ase／oxygenase， 安全性好，消除位置效应，无基因沉默现象，原核基 Rubisco，E．C．4．1．1．39)大亚基的 基因高度保守 因表达方式等。但是到 目前为止，几乎所有的叶绿 fHasebe等 1992；Andersson和Backlund2008)。本 体转化成功的报道都集中于衣藻和烟草等模式植 文报道克隆得到甘薯叶绿体rbcL基因的完整序列， 物。最近，在油菜(Hou等2003)、拟南芥(Sikdar 为在甘薯中开展叶绿体基因工程