甘蓝型油菜BnADC基因的克隆及原核表达.pdfVIP

2012年 2月 中国油料作物学报 2012，34(1)：008—015 Chinesejournalofoilcropsciences 甘蓝型油菜BnADC基因的克隆及原核表达 洪 林 ，闰晓红 ，袁亚宾 ，刘王辉 ，胡长清 ，李 晨 ，陈春丽 ，魏文辉¨ (1．农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，中国农业科学院油料作物研究所，湖北 武汉，430062； 2．重庆市农业科学院果树研究所，重庆 江津 402260；3．华中农业大学生命科学与技术学院，湖北 武汉，430070) 摘要：利用同源克隆和RACE(RapidamplificationofcDNAends)技术从甘蓝型油菜中克隆到精氨酸脱羧酶 (Argininedecarboxylase，ADC)基因cDNA全长序列，命名为BnADC。BnADC全长为2649bp，包含 344bp的5非翻 译区(5Untranslatedregion，5一UTR)、226bp的3非翻译区(3Untranslatedregion，3一UTR)和2079bp的完整开 放阅读框(openreadingframe，ORF)，编码75．1kD的蛋白质。5 UTR中含有 12bp的uORF(Upstreamopenreading frame)，编码MIRE4个氨基酸。氨基酸同源性比对表明，BnADC蛋白与其他植物ADC蛋白具有很高的相似性，与 芥菜的同源性高达93％；系统进化树分析表明，BnADC与芥菜、拟南芥的ADC亲缘关系较近。在获得全长cDNA 的基础上，构建融合表达载体pET30a(+)一BnADC，转化大肠杆菌(Escherichiacoli)表达菌株BI21(DE3)，SDS— PAGE检测到一个约81．1kD的融合蛋白被 E．coil表达，且融合蛋白主要存在于菌体沉淀中。 关键词：甘蓝型油菜；精氨酸脱羧酶基因；同源克隆；RACE；原核表达 中图分类号：$565．403 文献标识码：A 文章编号：1007—9084(2012)01—0008—08 CloningandprokaryoticexpressionofBnADC genefrom BrassicanapusL． HONG Lin ，YAN Xiao—hong ，YUAN Ya—bin ，LIU Wang—hui， HU Chang—qing ，LIChen ，CHEN Chun—li¨ WEIWen—hui ， (1．KeyLaboratoryofBiologyandGeneticImprovementofOilCrops，Ministry Q厂 griculture；OilCropsResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Wuhan430062，China； 2．FruitResearchInstitute，ChongqingAcademyofAgriculturalSciences，Chongqing402260，China； 3．SchoolofLfieSciencesandTechnology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China) Abstract：AnargininedecarboxylasegeneADC，namedBnADC，wasisolatedbyhomologouscloningand RACE technologyusingfreshbudofBrassicanapusL．CVZhongshuang6．ThefullcDNA was2649bpincluding 344bpof5 UTR，226bpof3一UTRand2079bpofanopenreadingframe(ORF)．AlsoasmalluORFenco． dingfouraminoacids，asMIRE，wasfoundin5 一UTR．Aminoacidho