细胞培养结合实时荧光RT-PCR法快速检测7型腺病毒感染.pdfVIP

维普资讯 · 594 · ChinJNosocomiolVo1．18No．42008 · 论 著 · 细胞培养结合实时荧光 RT～PCR法 快速检测 7型腺病毒感染 尚定 昆 ，申宝玲 ，郑晓群。，彭 颖 ，林新新 (1．乐清市第二人 民医院检验科 ，浙江 乐清 325608；2．温州医学院检验医学院、生命科学院， 浙江 温州 325027；3．温州医学院附属第二医院检验科 ；浙江 温州 325027) 摘要：目的 建立一种细胞培养与实时荧光 RT-PCR相结合的检测 7型腺病毒 (ADV7)感染的技术。方法 A549 细胞分离培养鼻咽分泌物中的腺病毒纯化后，以感染复数 (MOI)为 0．1、0．5、5，0和 10．0的纯化病毒感染 A549 细胞 ，分别在感染后 3、6、12和 24h提取总 RNA进行 ADV7E1A基 因的实时荧光 RT-PCR检测并测序验证 ；最 后用该法直接检测鼻咽分泌物标本 中的7型腺病毒。结果 实时荧光 RT-PCR最快可在感染后 3h检测 出0．5 M0I病毒感染的早期转录物 ；感染后 6h可检测 出0．1MOI病毒感染的早期转录物 ；鼻咽分泌物标本直接感染 后 6h即可检测到病毒的早期转录物 结论 细胞培养结合实时荧光 RT_PcR法能快速 、灵敏、特异地检测出感 染性的7型腺病毒 ，具有一定的推广应用价值 。 关键词 ：腺病毒 ；细胞培养 ；实时 ；RT_PCR 中图分类号 ：R373 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—4529(2008)04—0594—04 DeterminationofAdenovirusType7byCellsCultureCombinedwithRT-PCR SHANG Ding—kun ，SHEN Bao—ling，ZHENG Xiao—qun，PENG Ying，LIN Xin—xin (*TheSecondPeopleSHospital，Yueqing，Z ejiang325608，China) Abstract：OBJECTIVEToestablishamethodfordetectingadenovirustype7bycellsculturecombinedwithreal- timefluorescentRT—PCR．METHODSAfterpurifiedadenoviruswasdissociatedfrom nasopharyngealsecretionin A549cells，ADV7EIA genesweredetectedbyreaLtimeRT—PCR assayandsequenceanalysisofcellsinfected with0．1，0．5， 5．0 and 10．0 MOIADV7 at3， 6， 12 and 24 h postinfection． Then theadenovirus in nasopharyngealsecretionwasdetected withthesimilarmethod．RESULTSEarly transcriptionofE1A genesof adenovirustype7 could bedetected byreal—timeRT～PCR at3h postinfection with 0．5MOIvirus；orat6 h postinfectionwith 0．1MOIvirus；Earlytranscription ofE1A genes could bedetected at6 h postinfection in nasopharyngealsecretion．CONCLUSIONSThemethodbycellsculturecombinedwith real—timefluorescentRT— PCR issensitive，specific