乳腺癌靶标蛋白kdm5b 的表达及纯化 - 生命科学研究.pdf

20 卷 6 期 生命科学研究 灾燥造援20 晕燥援6 年 月 圆园16 12 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Dec. 圆园16 DOI ：10.16605/ki.1007-7847.2016.06.007 乳腺癌靶标蛋白KDM5B 的表达及纯化 1 2* 1* 少杰 春喜 韩 伟 , , (1. 东理工大学 药学院，中国上海 200237 ；2. 中国科学院上海有机化学研究所 生命有机化学国家重点实验室，中国上 海200032) 要 组蛋白修饰是表观遗传重要的调控机制之一 在基因表达调控 异染色质形成等生命过程中起着重要 尧 作用 组蛋白去甲基化酶lysine demethylation 5B (KDM5B)是参与组蛋白修饰的一种重要蛋白质 Jumonj i C 遥 (Jmj C)是其催化结构域 且与乳腺癌密切相关 现以 5 基因为模板 通过PCR 分别扩增Jumonj i N (JmjN) 遥 kdm b 尧 JmjC 结构域片段 用5 GS linker 连接 插入到原核表达载体pGEX-6p-1 转化至Rosetta (DE3)感受态细胞并 表达 重组蛋白经 和柱GSTrap尧分子筛superdex G75 和阴离子交换柱Resource Q 纯化后 再进行圆二色谱 和体外酶活实验 SDS圆二色谱和MALDI-TOF 质谱分析结果表明 成功获得纯度较高的重组蛋白 且 遥 尧 具有去甲基化的活性 以上结果为进一步基于JmjC 结构域进行小分子抑制剂筛选奠定了基础 遥 遥 关键词 表观遗传 组蛋白修饰 去甲基化酶 乳腺癌 KDM5B 表达纯化 曰 曰 曰 曰 曰 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1007-7847(20 16)06-0502-08 Expression and Purification of Breast Cancer Target Protein KDM5B 1 2* 1* WANG Shao-jie , WANG Chun-xi , HAN Wei (1. Sch