8种氨基糖苷类抗生素fdnb衍生化产物的电喷雾离子阱质谱研究.doc

8种氨基糖苷类抗生素FDNB衍生化产物 的电喷雾离子阱质谱研究 周茂金，苏美英，梅如冰 山东省泰安市中心医院，泰安 271000 摘要：目的 采用电喷雾离子阱质谱（ESI-MSn）法研究8种氨基糖苷类抗生素FDNB衍生化产物的质谱裂解规律。方法 分别取氨基糖苷类抗生素FDNB衍生化产物溶液，将其直接导入ESI离子源进行分析。结果 在正离子检测方式下，各化合物在二级质谱分析时，均可发生A环与B环之间的糖苷键断裂，生成脱去A环的碎片离子；在三级质谱分析时，进一步发生B环与C环之间的糖苷键断裂，生成脱去B环或C环的碎片离子。新霉素B由四个环组成，在三级质谱分析时，其衍生化产物发生B环与C环之间的糖苷键断裂，主要生成脱去B环的碎片离子；在四级质谱分析中，进一步生成脱去C环或D环的碎片离子。结论 通过LC/MS/MS和HPLC-UV分析获得了氨基糖苷类抗生素FDNB衍生化产物的色谱行为信息，为该类药物分析方法（HPLC-UV和LC/MS/MS）的建立和结构解析提供依据。 关键词：电喷雾离子阱质谱法；氨基糖苷类抗生素；FDNB衍生化产物；结构解析 氨基糖苷类抗生素（aminoglycoside antibiotics）是由微生物产生或经半合成得到的一类由氨基糖与氨基环醇结合而成的碱性化合物。由于该类药物具有性质稳定，抗菌谱广，杀菌力强，水溶性好，排泄迅速完全等特点，目前在临床上仍然是重要的抗感染药，广泛用于各种革兰阴性菌感染的治疗[1(3]。生物样品中该类药物的测定方法有多种，但高效液相紫外检测法 (HPLC-UV) 是目前常用的分析方法之一[4]，由于该类药物在结构中缺乏发色团，不能直接用紫外法进行检测，而2,4-二硝基氟苯 (FDNB)与氨基糖苷类抗生素反应后，生成的衍生化产物在365 nm 处具有较强的紫外吸收[5]，因此可用紫外法测定。应用此方法已成功地对威替米星[4]、庆大霉素[5,6]、妥布霉素[7]、奈替米星[8]、丁氨卡那霉素[9]、新霉素[9]、西索霉素[9]和巴龙霉素[10]等进行了定量分析，其中只有威替米星和依替米星与FDNB形成衍生化产物的结构用电喷雾离子阱多级质谱法（ESI-MSn）进行了鉴定[4]，而其它氨基糖苷类抗生素FDNB衍生化产物的ESI-MSn分析尚未见报道。由于该类药物与FDNB形成的衍生化产物显弱碱性，在质谱上具有较强的正离子响应，因此，本实验对8种氨基糖苷类抗生素（图1）的FDNB衍生化产物进行ESI-MSn分析，归纳其质谱裂解规律，并对其色谱行为进行研究。 材料与方法 仪器、药品与试剂 仪器：LCQ型液相色谱(质谱联用仪（美国Finnigan公司，San Jose, CA, USA），LC-10A泵（日本岛津），HP1100高效液相色谱仪（美国Hewlett-Packard公司），包括G1322A 四元泵、G1314A紫外检测器、G1316A柱温箱、G1322A脱气机和Rev.A.06.03色谱工作站。 药品与试剂：硫酸庆大霉素注射液（8 ( 104 u/2 mL, 批号080311，山东鲁抗医药股份有限公司），硫酸卡那霉素注射液（1 ( 105 u/2 mL，批号080923，山东鲁抗医药股份有限公司），硫酸阿米卡星注射液（1 ( 105 u/2 mL，批号080519，山东鲁抗医药股份有限公司）硫酸小诺霉素注射液（60 mg/2 mL，批号090211，徐州莱恩药业有限公司），硫酸妥布霉素注射液（60 mg/2 mL，批号090223，山东鲁南制药厂），硫酸奈替米星注射液（1 ( 105 u/2 mL，批号090129，山东鲁南制药厂），硫酸西索霉素注射液（50 mg/1 mL，批号090223，山东鲁南制药厂），硫酸新霉素原料药（批号090323，山东鲁南制药厂）。 2,4-二硝基氟苯（FDNB，分析纯，E. Merck Darmstadt, 德国），三羟甲基氨基甲烷（Tris，分析纯，沈阳化学试剂厂），醋酸铵（分析纯，沈阳化学试剂厂），甲醇（色谱纯，山东禹王化学试剂厂），乙腈（色谱纯，山东禹王化学试剂厂）。 1.2 色谱条件和质谱条件 色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18柱（200 ( 4.6 mm I.D.，5 ?m粒径，北京迪马公司产品），预柱为C18柱（1.0 ( 4.6 mm I.D.，5 (m粒径），流动相为甲醇(10 mmol·L(1醋酸铵（85:15, v/v，测定阿米卡星时，比例为80:20, v/v），流速为1.0 mL·min(1 （LC/MS/MS分析时，流速为0.5 mL·min(1），检测波长365 nm，柱温25(C，进样量为20 (L。 质谱条件：电喷雾离子源，正离子方式检测。离子源喷射电压：4.50 kV；毛细管温度：200(