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- | 1994-08-10 颁布
- | 1994-08-10 实施
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GB/T 15206—1994
中华人民共和国国家标准
食品中胆固醇的测定方法
Method for determination of cholesterol in foods
GB/T 15206—1994
1 主题内容与适用范围
本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。
本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。
2 原理
当固醇类化合物与酸作用时,可脱水并发生聚合反应,产生颜色物质。因
此可先对食品样品进行提取和皂化,用硫酸铁铵试剂作为显色剂,测定食品中
胆固醇的含量。
3 试剂
全部试剂除注明外均匀分析纯,实验用水蒸馏水。
3.1 石油醚。
3.2 无水乙醇。
3.3 浓硫酸。
3.4 冰乙酸:优级纯。
3.5 磷酸。
3.6 胆固醇标准物质。
3.7 胆固醇标准液。
3.7.1 胆固醇标准储备液(1 mg/mL):精确称取胆固醇 100 mg,溶于冰乙酸
中,并定容至 100 mL。此液至少在 2 个月内保持稳定。
3.7.2 胆固醇标准常备液(100μg/mL):吸取胆固醇标准储备液 10 mL,用
冰乙酸定容至 100 mL。此液用时临时配制。
3.8 铁矾显色剂。
3.8.1 铁矾储备液:溶解 4.463 g 硫酸铁铵[FeNH (SO) ·HO]于 100 mL85%
4 4 2 2
磷酸中,贮于干燥器内,此液在室温中稳定。
3.8.2 铁矾显色液:吸取铁矾储备液 10 mL,用浓硫酸定容至 100 mL。贮于
干燥器内,以防吸水。
3.9 50%氢氧化钾溶液:称取 50 g 氢氧化钾,用蒸馏水溶解,并稀释至 100 mL。
3.10 5%氯化钠溶液:称取 5 g 氯化钠,用蒸馏水溶解,并稀释至 100 mL。
3.11 钢瓶氮气:纯度 99.99%。
4 仪器和设备
4.1 实验室常用设备。
4.2 721 型分光光度计。
4.3 电热恒温水浴。
4.4 电动振荡器。
4.5 具玻塞试管:体积 10 mL、25 mL。
5 操作步骤
5.1 胆固醇标准线
中华人民共和国卫生部中华人民共和国卫生部 1994—08—101994—08—10 批准 199批准 1994—08—104—08—10 实施 实施
GB/T 15206—1994
吸取胆固醇标准常备液 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL 分别置于10 mL 试管
内,在各管内加入冰乙酸使总体积皆达 4 mL。沿管壁加入 2 mL 铁矾显色液,混
匀,在 15~90 min内,在 560~575 nm 波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐
标,吸光度值为纵坐标做标准曲线。
5.2 样品测定
5.2.1 食品脂肪的提取与测定
根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。
并计算出每 100 g 食品中的脂肪含量。
5.2.2 食品胆固醇的测定
将提取的油脂 3~4 滴(约含胆固醇 300~500μg),置于 25 mL 试管内,准
确记录其重量。加入 4 mL 无水乙醇,0.5 mL50%氢氧化钾溶液,在 65℃恒温水
浴中皂化 1 h。皂化时每隔 20~30 min 振摇一次使皂化完全。皂化完毕,取出
试管,冷却。加入 3 mL5%氯化钠溶液,10 mL 石油醚,盖紧玻塞,在电动振荡
器上振摇 2 min,静置分层(一般约需 1 h 以上)。
取上层石油醚液 2 mL,置于 10 mL 具玻塞试管内,在 65℃水浴中用氮气吹
干,加入 4 mL 冰乙酸,2 mL 铁矾显色液,混匀,放置 15 min后在 560~575 nm
波长下比色,测得吸光度,在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。
6 结果计算
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