沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR快速检测技术的建立与应用.pdfVIP

检验医学2008年 11月第 23卷第6期 LaboratoryMedicine，November2008，Vol23．No6 文章编号：1673—8640(2008)06-0642-04 中图分类号：R378．2 文献标识码：A 沙门菌、志贺茵和副溶血性弧菌的多重PCR 快速检测技术的建立与应用 张敬平 ， 吴家林， 肖勇， 凌霞 (无锡市疾病预防控制中心，江苏无锡 214023) 摘要：目的 建立快速同时检测沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌的多重聚合酶链反应 (PCR)技术。方法 根 据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌tdh基因序列设计引物，进行PCR扩增及电泳检测。同时 优化反应体系，测定特异性和灵敏度。结果 该多重PCR技术能在8h内同时检测3种 目的菌，通过检测其他 9种常见食源性致病菌，结果表明该方法特异性好 ，多重PCR检测灵敏度分别为：沙门菌 10cfu／mL，志贺菌 10 cfu／mL，副溶血性弧菌 10cfu／mL。并进行了人工模拟食品和粪便样品的检测。结论 初步建立能在8h内快 速、灵敏、特异地同时测定沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重 PCR检测技术。 关键词：多重聚合酶链反应；沙门菌；志贺菌；副溶血性弧菌 EstablishmentandapplicationofmultiplePCRtechniquefortherapiddetectiouof Salmonellasp．，Sh el- sp．andVibrioparahaemolyticus ZHANGJingping，WUJialin，XIAOy0 ，LINGXia． (WuxiCenterforDis— easeControlandPrevention，Wuxi214023，China) Abstract：0bjective ToestablishamultiplexPCRtechniqueforthesimuhaneousdetectionofSalmonellasp． (SM)，ShigeUasp．(SP)andVibrioparahaemolyticus．(VP)．Methods Threesetsofprimersweredesignedtoam— plifythegenesegmentsofhilAofSalmonellasp．，ipaHofSh喀ellasp．，andtdhofVibrioparahaemolflicus，andthe productswereanalyzedbyelectrophoresis．Atthesametime，thissystemwasoptimized，andthespecificityandsensi— tivityofthissystem wereevaluated．Results Threetargetbacteriaweredeteetedin8hbyusingthismultiplePCR technique．Thehighspecificitywasdemonstratedbydetectingotherninekindsoffood-bornepathogenicbacteria．and thedetectionsensitivityofmultiplexPCR were10 cfu／mLforSM ，10 cfu／mLofrSP，10cfu／mLofrVP．Artificially contaminatedfoodandstoolsampleswereinspectedwiththismethod．Conclusions A rapid ，specific，andsensitive multiplexPCRtechniqueofrthesimultaneousdetectionofSalmonellasp．，Shigellasp．andVibrioparahaemo lyticus．in8 hhasbeenstudiedprimarily． Keywords：Multiplex；Salmo nellasp．；Shigellasp．；Vibrioparahaemo lyticus