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Caspase-3体外对PIAS1酶切作用赵 瑞1唐春花1赵文元1刘建民1*洪 波1许 奕1黄清海1，霍克克2 1.第二军医大学长海医院临床神经医学中心，神经外科，上海 200433 2.复旦大学生命科学学院遗传学研究所，上海 200433[基金项目]国家自然科学基金．Supported by the National Natural Science Foundation of China[作者简介]赵 瑞，博士，讲师、主治医师.E-mail:Z_ray1979@126.com *通信作者(Corresponding author).Tel:021 Email:chstroke@163.com [摘要]目的 Caspase-3体外对PIAS1蛋白。方法 以表达PIAS1蛋白，采用CO-IP）实验 Caspase-3间结合作用；采用体外蛋白酶切实验检测Caspase-3对PIAS1的酶切作用结果 CO-IP实验发现Caspase-3可与PIAS1蛋白结合酶切实验PIAS1的酶切片段。结论[关键词] Caspase-3;PIAS1;酶切cleaved by caspase-3: an ex vivo study ZHAO Rui,TANG Chun-hua,ZHAO Wen-yuan,LIU Jian-min*,HONG Bo,XU Yi,HUANG Qing-hai,HUO Ke-ke 1.Department of Neurosurgery, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China 2.School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China [Abstract]Objective To validate the previous preliminary result that PIAS-1 was cleaved by Caspase-3 with ex vivo experiment. Methods A CO-IP was performed with lysate of 293T cells. PIAS1 collected from 293T cells with pull-down was incubated with active Caspase-3. Western blot was used to test the result.Results Caspase-3 binding to PIAS1 was confirmed with co-immunoprecipitation experiment. PIAS1 can be cleaved by active Caspase-3. Conclusion Ex vivo study verified the binding effect of Caspase-3 and PIAS1, as well as the cleavage of PIAS1 by Caspase-3. [Key words]caspase-3;PIAS1; cleavage Caspase-3是Caspase家族的一个重要成员，在细胞凋亡过程中起关键作用。Caspase-3激活后酶解切割其特异性底物，使底物结构改变或影响特定的信号分子而参与细胞凋亡过程。已有研究[1-2]证实Caspase-3参与癫痫发作所致的神经元凋亡过程。我们的前期研究[3]发现，在癫痫发作所致海马神经元凋亡中存在Caspase-3新的作用蛋白——活性STAT1的抑制蛋白（protein inhibitor of activated STAT1，PIAS1），研究结果提示PIAS1可能是Caspase-3的蛋白底物。因此，本研究进一步通过体外实验验证Caspase-3与PIAS1蛋白的相互作用，为后续研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 细胞株及主要试剂 HEK293T细胞株由本课题组保存；DMEM培养基、胎牛血清、PBS、0.25%胰蛋白酶为Gibco公司产品；兔抗PIAS1单克隆抗体、兔抗Caspase-3 单克隆抗体为Epitomics公司产品；HRP标记的羊抗兔IgG为上海康成生物工程有限公司产品；Western及IP细胞裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、蛋白G琼脂糖珠悬液及兔IgG为碧云天生物技术研究所产品；重组人活性Caspase-3蛋白CASP-3为ProSpec-Tany TechnoGene有限公司产品；PVDF膜及ECL超敏发光试剂盒为