壳聚糖螯合凝胶层析法纯化血液超氧化物歧化酶 - 食品与生物技术学报.pdfVIP

Baoquan ， al ： s of Purification on Superoxide Dismutase(SOD) WANG et Proces 研究论文 Research Article from Blood by Chitosan Affinity Chromatography 壳聚糖螯合凝胶层析法纯化血液超氧化物歧化酶 王保全 1 ， 平 娟 1 ， 张永州 1 ， 黄 继海 1 ， 李 昭华 2 ， 董先智 2 ， 庞 晓斌 *3 ， 李梅基 4 （1. 河南大学淮河临床学院，河南开封 475001 ； 2. 中国科学院 生物物理研究所，北京 100101； 3. 河南大学药 学院，河南开封 475001 ； 4. 兰州大学生物工程学院，甘肃兰州 730000 ） 摘要： 首 先 利 用 不 同 相 对 分 子 质 量 聚 丙 烯 酸 钠 从 动 物 血 液 中 分 离 纯 化 出 超 氧 化 物 歧 化 酶 （SOD ），探索不同相对分子质量聚丙烯酸钠对 SOD 提取酶活性的影响 。 鉴于离子交换层析和凝 胶过滤层析纯化时所用材料较昂贵 ，探索出一条适合工业化大规模生 产的纯化方法 。 利用壳聚 糖 、亚氨基二乙酸 （IDA ）和环氧氯丙烷等材料合成一种新填料 ，根据亲和层析原理去除杂 蛋白 质 ，获得电泳 纯级超氧化物歧化酶 ，使 酶活性进一步提 高 ，并和离子交换层析和凝胶过滤层析方 法相对照 ，以期自制填料 能代替 Sephedex ，DEAE-sepherose-fast flow 等 传 统 昂贵填料 ，以适合 工业化生产 。 结果显示 ，低相对分子质量聚丙烯酸钠在血液 SOD 提 纯工艺 中更为适用 ，超滤后 的粗 酶液 经 离子交换层析、 凝胶过滤层析和壳聚糖亲和层析纯化后经 SDS聚 丙烯酰胺 凝胶 电泳后呈明显的单 一条 带 ，单 亚基分子量 16 kD ，比活 力达 5 585 U/mg 和 6 148 U/mg ， 739 U/mg ；产 品得率 分 别为 和 ， ；纯化后 活性 回收率分 别为 ， ， 4 18.1% 13.7% 15.5% 61.2% 50.8% 42.6% 。 表 明 壳 聚 糖 亲 和 层 析 方 法 在 新 工 艺 后 续 纯 化 工 艺 中有 望 代 替 Sephedex DEAE- sepherose-fast flow 为基础 的传统 纯化方法 ，适合工业化大规模生产 。 关键词： 相对分子质量 ；聚丙烯酸钠 ；血液 ；超氧化物歧化酶 中图分类号： 464.8 文献标志码： 文章编号： — （ ） — — TQ A 1673 1689 2014 03 0248 07 Process of Purification on Superoxide Dismutase(SOD) from Blood by Chitosan Affinity Chromatography 1 1 1 1 ，