论着· 中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达 - 第二军医大学学报.pdfVIP

第二军医大学学报 年 月第 卷第 期 ：／／ ２００８ ７ ２９ ７ ｈｔｔ ｗｗｗ．ａｓｍｍｕ．ｃｎ 　 　 ｐ ｊ ·７８１ · 　　 ， ， ， ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｊｕｌ．２００８ Ｖｏｌ．２９ Ｎｏ．７ ｙ ｙ ： ／ ·论 著· ＤＯＩ １０．３７２４ＳＰ．Ｊ．１００８．２００８．００７８１ 　 中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达、纯化及活性特征 廖 剑 　 南京军区福州总医院检验医学研究所，福州 ３５００２５ ［摘要］ 目的 将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶（ ）的基因克隆于原核表达载体，并通过表达获得重组的 蛋 ＴＰｘ ＴＰｘ 　 白。方法 将已获得的 片段克隆于原核表达载体 （ ） ，转化大肠杆菌 （ ），获得重组表达质粒 ＴＰｘｃＤＮＡ ＥＴ３２ａ ＋ Ｍ ＢＬ２１ ＤＥ３ ｐ （ ） 。 下经 诱导，该融合蛋白在大肠杆菌 （ ）中表达。获得的重组 蛋白再经过纯化， ＥＴ３２ａ ＋ ＭＴＰｘ ３７℃ ＩＰＴＧ ＢＬ２１ ＤＥ３ ＴＰｘ ｐ 用 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ ）分析重组蛋白。并对重组蛋白进行活性鉴定和结构分析。 构建的重组质粒 ＳＤＳ ＳＤＳＰＡＧＥ 结果 （ ） 在大肠杆菌中高效表达，经纯化后的重组 蛋白纯度可达 以上，其单体相对分子质量为 。 ＥＴ３２ａ ＋ ＭＴＰｘ ＴＰｘ ９０％ ２４４６０ ｐ 重组 蛋白是以同源二聚体和单体混合的形式存在，在二硫苏糖醇（ ）存在时具有还原 活性和对超螺旋 或 ＴＰｘ ＤＴＴ Ｈ Ｏ ＤＮＡ ２ ２ 对硫醇基敏感蛋白的保护作用。 本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了重组 蛋白，并且证实其活性与其高级结 结论 ＴＰｘ 构紧密相