药物分子与血清白蛋白结合反应的荧光法研究进展 - 河北师范大学学报.pdfVIP

第27 卷 第2 期 河北师范大 报(自然科 版) Vol.27 No.2 2003 年　3 月 Journal of Hebei Normal Univer ity (N atural Science Edition) M ar.2003 药物分子与血清白蛋白结合反应的荧光法研究进展 李　娜, 　魏永巨 (河北师范大 化 院, 河北 石家庄　050016) 摘　要:综述了荧光法对药物分子与血清白蛋白相互作用的研究进展.介绍了测定药物分子在蛋白质上 的结合部位、结合数、结合常数和结合力类型的基本理论和实验方法, 讨论了药物对蛋白质构象的影响以及共 存金属离子对结合反应的影响, 列表总结了某些药物与血清白蛋白结合反应的实验结果, 简要讨论了研究中 存在的问题以及本领域的发展方向. 关键词:荧光;药物;血清白蛋白;结合反应 中图分类号:O 657.39　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5854(2003)02-0 176-05 药物分子与血清白蛋白相互作用的研究是介于化 与生命科 之间的边缘性课题.从化 研究的 角度来看, 血清白蛋白与药物结合反应的研究主要包括结合位置、结合数与结合常数、作用力类型、共存 物质的影响以及药物在血液中的分配等.采用的研究方法有荧光法、平衡透析法、圆二色谱法、紫外光谱 法和色谱法等.用荧光法研究药物分子与蛋白质的结合反应可以综合利用蛋白质和药物的荧光猝灭、荧 光敏化、能量转移和实验条件的影响等方面的信息, 因而是主要的研究手段之一. 1 　研究内容与方法 1.1　结合部位的确定 [ 1] 血清白蛋白的三维晶体结构已探明, 有3 个类似的结构域 :Site Ⅰ, Site Ⅱ和Site Ⅲ.每个结构域又 含有A 与B 2 个亚结构域, 以槽口相对的方式形成圆筒状结构.大多数药物在血清白蛋白上的结合部位 为Site Ⅰ及Site Ⅱ.用荧光法确定药物分子在血清白蛋白上的结合部位常用以下方法. 1.1.1　用具有已知特定部位的探针来做代替[2, 3] 某些荧光探针对蛋白质不同区域有特异性的结合, 根据药物加入后对荧光探针的影响可以确定药 物结合部位.已知Site Ⅰ的探针有:华法令(Warfarin), 苯基保泰松(phnylbutazone ), 丹磺酰胺(dan y - lamide)等;Site Ⅱ的探针有:布洛芬(ibuprofen), 氯灭酸(flufenamic acid)等. 1.1.2 　通过For ter 能量转移理论来求药物与色氨酸残基之间的距离[4 ～7] 蛋白质的内源荧光主要是色氨酸发出的.利用Fro ter 能量转移理论, 可以求出和蛋白质作用的药 物与色氨酸残基之间的距离, 由此推测药物与蛋白质结合的空间部位.能量转移作用可以发生在药物 蛋白质复合物内部, 也可以发生在药物与蛋白质分子之间.在后一种情况时, 求得的药物与色氨酸残基 [7] 之间的距离表示分子扩散过程中药物分子与色氨酸残基的最近距离 . 1.2 　结合位点数与结合常数的测定 Scatchard 作图法是研究生物大分子与有机小分子结合反应的经典方法.此法在应用时须知道反应 体系中游离态药物的浓度, 这一点用荧光法测定时常不易做到, 而且Scatchard 作图法所得结果往往不 理想;因此, 在研究药物分子与蛋白质的结合反应中, Scatchard 作图法应用不多.张保林等曾用此法研 [8] 究了蒽醌及黄酮类化合物与人血清白蛋白的结合反应 . 蛋白质与药物分子发生反应时, 可引起体系荧光性质的改变, 有2 种情况:1)药物分子无荧光, 在 蛋白质溶液中加入药物后, 蛋白质的内源荧光被猝灭;2)药物分子有荧光, 蛋白质与药物混合后, 其内 收稿日期:2002 09 02;修回日期:2002 10 31 基金项目:河北省自然科 基金资助项目(200153);河北省教育厅博士基金资助项目 作者简介:李