分子发光-1.pptVIP

* D.磷光光谱 与发射光谱相同条件下的磷光光谱 激发光谱 发射光谱 * 200 250 300 350 400 450 500 荧光激发光谱 荧光发射光谱 nm 蒽的激发光谱和荧光光谱 * 三、荧光光谱的特征—激发光谱与发射光谱的关系 1、Stokes位移 在溶液中，分子的荧光发射波长总是比其相应的激发光的波长长，荧光发射这种波长位移的现象称为Stokes位移。 处于激发态的分子由于：①振动弛豫、内转换等损失了能量，②辐射跃迁可是跃迁到基态的较高振动能级，再通过振动弛豫损失能量；③与溶剂分子碰撞损失能量。因而产生了发射光谱波长的位移，这种位移表明在荧光激发和发射之间所产生的能量损失。 * 2. 镜像对称规则 ?ex =290nm (MAX) 固定?em=620nm(MAX) 固定?ex=290nm (MAX) ?em= 620nm(MAX) S0 4 3 2 1 S1 4 3 2 1 1→ 4 1→ 3 1→ 2 1→1 1 → 4 1 → 4 1 → 2 1 → 1 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一样）成镜像对称关系。 * 镜像规则的解释 吸收光谱的形状表明了分子的第一激发态的振动能级结构，而荧光发射光谱则表明了分子基态的振动能级结构。 一般情况下，分子的基态和第一激发态的振动能级分布相似，因此吸收光谱的形状与荧光发生光谱的形状呈镜像对称关系。 * 3、荧光发射光谱的形状与激发波长无关 一般地，用不同波长的激发光激发荧光分子，可以观察到形状相同的荧光发射光谱。 荧光分子无论被激发到哪一个激发态，处于激发态的分子经振动弛豫及内转换等过程最终回到第一激发态的最低振动能级。而分子的荧光发射总是从第一激发态的最低振动能级跃迁到基态的各振动能级上，所以荧光光谱的形状与激发波长无关。 * S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 外转换 l?3 T2 内转换 振动弛豫 分子吸收和发射过程的Jablonski能级图 l 4 * 1. 荧光强度与溶液浓度的关系 荧光强度If正比于吸收的光量Ia与荧光量子产率? 。 If = ? Ia 　　式中?为荧光量子效率，又根据Beer定律 Ia = I0 - It = I0(1- e -A) 　　I0和It分别是入射光强度和透射光强度。代入上式得 If = ? I0(1- 10 -A) = ? I0(1- e -2.3A) 三. 分子荧光(磷光)强度与浓度的关系 * 整理得： If =2.3 ? I0 ?bc 　　当入射光强度I0 和I一定时，上式为： If = K c 即荧光强度与荧光物质的浓度成正比，但这种线性关系只有在极稀的溶液中，当A?0.05时才成立。对于较浓溶液，由于猝灭现象和自吸收等原因，使荧光强度和浓度不呈线性关系。 * 【例】NADH的还原型是一种重要的强荧光性物质，其最大激发波长为340 nm，最大发射波长为465 nm，在一定的条件下测得NADH标准溶液的相对荧光强度如下表所示。根据所测数据绘制标准曲线，并求出相对荧光强度为42.3的未知液中NADH的浓度。 * 第二章 molecular luminescence analysis * 光学分析法 光谱分析法 非光谱分析法 原子光谱分析法 分子光谱分析法 原 子 吸 收 光 谱 原 子 发 射 光 谱 原 子 荧 光 光 谱 X 射 线 荧 光 光 谱 折 射 法 圆 二 色 性 法 X 射 线 衍 射 法 干 涉 法 旋 光 法 紫 外 光 谱 法 红 外 光 谱 法 分 子 荧 光 光 谱 法 分 子 磷 光 光 谱 法 核 磁 共 振 波 谱 法 * §2.1 分子发光的基本原理 第一次记录荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物学家N.Monardes，1575年他提到在含有一种称为“Lignum Nephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝色。 直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光光度计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍微长些，才判断这种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不是由光的漫射作用所引起的，从而导入了荧光是光发射的概念，他还由发荧光的矿石“萤石”推演而提出“荧光”这一术语。 1867年，Goppelsrod