降糖药艾塞那肽及利拉鲁肽的固相合成及艾塞那肽的药效学评价.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………”1 英文摘要………………………………………………………………………………3 符号说明……………………………………………………………………………………·5 前言…………………………………………………………………………………………………·7 鄹 雷…………………………………………………………………………………………………’’7 第一章艾塞那肽的合成、纯化及鉴定 材料与方i；}…………………………………………………………………………·13 结果…………………………………………………………………………………………17 {寸论…………………………………………………………………………………………22 第二章利拉鲁肽的合成、纯化及鉴定 材料与方i5叁…………………………………………………………………………”26 结果…………………………………………………………………………………………29 ．i寸论…………………………………………………………………………………………32 第三章艾塞那肽体外细胞活性和体内降血糖实验 材料与方i5冬………………………………………………………………………·34 结果…………………………………………………………………………………………37 讨论…………………………………………………………………………………………40 结论………………………………………………………………………………………………“42 附 参考文献…………………………………………………” 综 致谢………………………………………………………………………………………………”61 攻读学位期间发表的学术论文……………………………………………………”62 原创性声明…………………………………………………………………………………·63 降糖药艾塞那肽和利拉鲁肽的固相合成及艾塞那肽的药效学评价 研究生：张许 专业：药理学 导师：刘卫教授 中文摘要 目的： 本题旨在合成多肽类降糖药艾塞那肽和利拉鲁肽，确定一条操作简单可行的固相 合成路线；摸索制备型高效液相纯化两种药物的条件并得到纯度为99％以上的多肽； 部分药效学实验证明艾塞那肽的刺激胰岛B细胞增殖作用和降糖作用。 方法： 1．合成部分：艾塞那肽和利拉鲁肽合成路线均采用固相合成法，9。芴甲氧羰基 N，N一二异丙基碳二亚胺为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。中间过程采用茚三酮检测 鉴定是否反应完全。采用半制备型高效液相进行纯化，色谱柱为安捷伦ZORBAX 产物峰冷冻干燥。高效液相法测定其含量，质谱鉴定产物分子量。 殖活性作用，分别在不同浓度的本实验室制备得艾塞那肽和对照品(礼来公司的艾塞 那肽注射液)干预下培养INS．1细胞，测定吸光度值看是否刺激细胞增殖，计算增殖 率及ED50以对比两种药物活性是否相当。腹腔注射链佐霉素诱导小鼠糖尿病模型， 本实验室制备艾塞那肽组。用药15d期间间隔测量血糖观察其降血糖作用。停药1 周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。 结果： 1．合成部分：得到明确的合成路线及纯化条件，艾塞那肽洗脱梯度为：初始梯 1 归一化法计算纯度为93．5％。经质谱鉴定艾塞那肽分子量为4186，利拉鲁肽为3751， 与实际分子量相符。 2．艾塞那肽的部分药效学实验：艾塞那肽可以刺激胰岛细胞的增殖活性，在浓 度为120nmol／L时对细胞的增殖作用最强；本实验室合成的艾塞那肽与对照品艾塞那 肽注射液活性相当；连续注射艾塞那肽后，样品组与对照组小鼠血糖明显低于糖尿病 模型组(P0．05)，样品组与对照组之间差异无统计意义；糖耐量实验结果表明艾塞 那肽能明显改善糖尿病小鼠的糖耐量曲线。 结论： 本实验设计的两条路线操作简单、试剂单一、成本较低，可以用来少量合成艾塞 那肽和利拉鲁肽。纯化及含量测定方法简便、准确、可重复性高，得到了纯度较高的 药物。药效学实验证明艾塞那肽可以刺激胰岛细胞的增殖及降低糖尿病小鼠的血糖。 关键