大豆分离蛋白水解多肽聚集物的组成及相互作用木.pdfVIP

维普资讯 华 南理工大 学学报 (自然科 学版 ) 第34卷 第8期 JournalofSouthChinaUniversityofTechnology Vo1．34 NO．8 2006年 8月 (NaturalScienceEdition) August 2006 文章编号 ：1000-565X(2006)08—0105—05 大豆分离蛋白水解多肽聚集物的组成及相互作用木 于泓鹏 唐传核 曾庆孝 杨晓泉 (华南理工大学 轻工与食品学院，广东 广州510640) 摘 要：研究了大豆分离蛋白(SPI)的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集作用，以及参与聚 集组分的氨基酸组成及其相互作用．十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE) 和SE．HPLC分析显示，SPI的枯草杆菌蛋白酶降解产物大部分为分子质量小于6、5ku的 小分子组分，聚集物主要 由这些小分子组分组成．聚集物可溶于脲素、盐酸胍或 SDS，而难 溶于 ．巯基 乙醇．氨基酸分析显示聚集物中的疏水性氨基酸含量高于 SPI．说明疏水相互 作用是聚集物形成的主要推动力，氢键、静电引力参与稳定聚集物的结构，而二硫键很少 参与聚集物的形成．文中还从蛋白质分子结构的角度，探讨了SPI的枯草杆菌蛋白酶水解 多肽的聚集机理． 关键词：大豆分离蛋白；枯草杆菌蛋白酶；聚集；相互作用；机理 ． 中图分类号：TS214．2 文献标识码：A 蛋白质及其水解产物的聚集或沉淀是水解或发 学试剂公司)；枯草杆菌酶 (1500AU／g)、盐酸胍 酵过程的一个普遍现象．它直接导致了可溶性产物 (Guanidinehydrochloride，Gn—HC1)、脲素、十二烷基 产量的降低，在一些情况下高蛋白含量的蛋白质酶 磺酸钠 (SDS)和 一巯基乙醇 (一Me)(上海伯奥生物 解产物甚至可以出现胶凝现象¨J，这可被用来制备 科技有限公司)；其他试剂均为分析纯或生化试剂． 具有新质地的非热凝胶食品．此外，聚集物多由疏水 以含有0．05％(质量分数)叠氮钠的20mmol／L磷 性的小分子肽组成，具有一定的生物活性和功能特 酸盐缓冲液 (pH7．0，45oc)作为标准缓冲溶液． 性，对聚集过程的调控和分离这些小分子肽提供了 1．2 主要仪器及设备 简便而又新颖的方法． LGJ一10冷冻干燥机 (北京四环科学仪器厂)；高 目前，国内外学者对动物蛋 白水解物或多肽的 速冷冻离心机(f3本 日立公司)；ECP3000三恒 电泳 聚集过程展开了一定的研究 引，但对大豆等植物蛋 仪(北京市六一仪器厂)；UVP凝胶成像系统 (White／ 白的相关研究较少．因此，本文中拟对大豆分离蛋 白 UitravioletTransilluminator，美 国)；Speetrumlab22PC (SPI)的枯草杆菌蛋白酶水解多肽聚集物进行研究． 分光光度计，Waters1525高效液相色谱 (美国Wa． 1 材料与方法 ters公司)． 1．3 方法 1．1 材料 1．3．1 SPI的制备 大豆分离蛋 白的制备参照