小鼠早期胚胎发育过程中tgf2α和egf2r mrna 的表达 - current .pdfVIP

动物学报 　48 (4) :567～569 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 α 小鼠早期胚胎发育过程中 TGF 和 EGFR mRNA 的表达 ① ① ② 严云勤 　谭景和 　张黎霞 ( ①东北农业大学生命学院 , 哈尔滨 150030) ( ②广东省农业科学院畜牧研究所 , 广州 510001) α 关键词 　小鼠 　胚胎发育 　RTPCR 　TGF 　EGFR 　　表皮生长因子家族的许多成员 , 例如表皮生长 提取总 RNA 。每次40 个胚胎 , 先用酸性台氏液孵 ( ) 因子 epidermal growth factor , EGF 、转化生长因 育几分钟 , 除去透明带 , 再用 PBS 洗去酸性液 , α ( α α) 子 transforming growth factor , TGF 、肝素 然后将胚胎移入预先置于冰上的 05 ml 离心管内。 结合性 EGF 样生长因子 (heparin binding EGFlike 往离心管中加入 Gilliland 裂解液 ( 05 % NP40 ; growth factor , HBEGF ) 和 两 性 调 节 蛋 白 10 mmol/ L Tris , p H 8 0 ; 10 mmol/ L NaCl ; 3 (amphiregulin , AR) 等 , 对哺乳动物早期胚胎发育 mmol/ L MgCl2 ) , 置冰箱内 2 h , 裂解胚胎。最后 具有重要的作用。如在体外培养液中添加 EGF 或 将裂解后的胚胎离心 1～2 min ( 13 000 r/ min) , α TGF , 则小鼠胚胎 mRNA 转录加快 , 蛋白质合成 小心取出含总 RNA 的上清液备用。 增加 , 细胞数量增多 , 胚胎发育速度加快 ( Werb , 13 　总 RNA 样品的检测 1990 ; Dardik et al . , 1991) 。这些生长因子都是通 β 由于动物细胞中普遍含有 肌动蛋白 , 所以先 过共同的受体 , 即 EGF 受体 ( epidermal growth 取部分总 RNA 样品 , 采用 RTPCR 方法检测 β factor receptor , EGFR) 发挥生物学作用的。但在 actin 的 mRNA 的表达 , 以观察总 RNA 样品在分 小鼠和猪等一些动物的早期胚胎中检测不到 EGF 离过程中是否受到损失。同时由于设计的 β actin 的表达 , 说明外源 EGF 可能起主要作用。我们通 PCR 引物扩增基因片段是跨越基因组内含子的 , 过比较灵敏的 RTPCR 技术检测小鼠早期胚胎中 所以根据扩增基因片段的大小 , 可以判断总 RNA α TGF 和 EGFR 的 mRNA 表达 , 进一步研究表皮 样品中是否污染了基因组 DNA 。 生长因子家族在小鼠早期胚胎发育中的作用。