从哈茨木霉液体培养基中酿出的提取物乙酸乙酯对灰霉病的抑制效果.docVIP

从哈茨木霉液体培养基中酿出的提取物乙酸乙酯对灰霉病的抑制效果 摘要：灰霉病菌是一种能够广泛寄生的一种真菌，它能感染多种农作物并且降低它们的产量。另一种真菌—哈茨木霉曾在商业上用作生物杀菌剂来控制灰霉病。在实际应用中，哈茨木霉的孢子有一些缺点，例如，它的功效受到环境状况和化学杀菌剂的影响。因此，用哈茨木霉的提取物来代替哈茨木霉菌或许也能用来控制灰霉病。应经发现，这种提取物可以抑制灰霉菌菌丝的生长、分生孢子的萌发和生长。在试管中，这种提取物对西红柿被灰霉病菌感染引起的灰霉表现出比较优秀的控制效果，而且保护的效果超过了治疗的效果。在盆栽试验中，这种保护和治疗效果能够持续15天以上。这种研究表明：这种提取物等同于甚至超过商业上的二甲酰亚胺类杀菌剂—速克灵。总之，哈茨木霉在液体培养基上发酵出来的乙酸乙酯在治疗西红柿因感染灰霉菌而产生的灰霉方面是非常有效的。 关键词：灰霉病，杀真菌剂，番茄灰霉病，木霉菌素，哈茨木霉。 前言：灰霉菌能够引起像番茄和黄瓜等多种作物产生灰霉病，并且造成严重的经济损失。常见的二甲酰亚胺类杀真菌剂如异菌脲和速克灵都曾用于抑制灰霉菌。但是，频繁使用这些人工合成的化学药品导致杀真菌剂的退化。常见的化学杀菌剂的残留将会污染环境并且威胁大众健康。因此，急需寻找一种更加有效更加安全的控制灰霉菌的方法。 生物杀菌剂在控制作物疾病方面较化学杀菌剂更加环保。在土壤中发现的哈茨木霉是能够有效抵抗包括灰霉菌在内的多种致病真菌。一些哈茨木霉菌株现在在市场上的生物防治代理商那都可以买得到，例如防治草莓、番茄、莴苣、和户外观赏植物的灰霉病的菌株。哈茨木霉的孢子在用到作物上时，它的效力受到天气状况、土壤环境和其他化学杀菌剂的影响极大。 为了提高哈茨木霉的应用，人们研究了它的生物防治机制，包括抗生作用、重寄生、竞争作用和诱导寄主抗性。人们还发现木霉属可产生40多种不同的次级代谢产物，它们可能有助于重寄生作用和抗生作用。 在我们以前的调查中，次级代谢产物木霉菌素与哈茨木霉发酵的液体培养基是分开的。这种混合物表现出抗包括灰霉菌在内的9中致病真菌的菌丝生长的效力。由于哈茨木霉能够产生抗菌的此生代谢产物，如木霉菌素，因此，用哈茨木霉液体培养基提取的化学物质来代替它的孢子从而达到防治灰霉菌的目的也是可能的。这可能是避免微生物防治缺点的一种有效解决方法，而且可以一直保持生物杀菌剂对环境的效益。这种探索的目的是系统的调查乙酸乙酯对控制灰霉菌引起的番茄灰霉病的能力。 材料与方法： 真菌的菌株 仪器与试剂 哈茨木霉和灰霉菌的准备 哈茨木霉液体培养基的提取物： 从哈茨木霉液体培养基中提取次级代谢产物，把过滤的液体与乙酸乙酯混合并不断摇动5分钟，一小时后，取上层的有机相，重复5次，获得有机提取物，再用旋转蒸发器浓缩干燥。 木霉菌素的测定 用GC-FID分析法鉴定并测定浓缩的提取物中的木霉菌素。 菌素生长的抑制 用提取物抑制灰霉菌的方法来测定生长率。用丙酮溶解的速克灵可湿性粉剂做正面的控制，一系列稀释的FBE在锥形瓶中与融化的PDA培养基混合， 一旦琼脂融化， 分生孢子产量的影响 测量直径后，移植病原菌至平板培养基上培养15天，每个平板浸没在10ml的无菌水并使分生孢子能够长在培养基的表面。分生孢子的数量决定于 的计算。 对分生孢子发芽的估价 分生孢子在2%的葡萄糖中悬浮和稀释。 平板在25℃的黑暗环境下培养5个小时，当芽管长度等于或大于孢子本身的时候就说明孢子发芽了。发芽率和发芽的抑制效果可以用如下公式计算：GCR(%)=GC/TC×100% IGC(%)=CGCR-SGCR/CGCR×100% GCR表示发芽率，GC表示发芽的分生孢子数，TC表示总的分生孢子数，IGC表示发芽抑制率， SGCR表示样品的发芽临率，CGCR表示发芽控制率。 试验分三次重复，速克灵被用于正控制，乙酸乙酯和水被用于溶剂控制。 在试管中对番茄灰霉病菌的抑制 试验挑选健康、新鲜并且大小一致的番茄。番茄表面首先用75%的酒精擦洗并干燥。对保护效应来说，在番茄表面擦上不同浓度的FBE并在25℃下培养24小时。培养之后，在每个番茄上用无菌针扎刺4下，并注入灰霉病菌的孢子。对治疗效应来说，在注射孢子24小时之后，擦上FBE。培养5天后，用测量病斑直径的方法来评价抑制效果。抑制效应的计算用如下公式计算： IE(%)=DC-DS/DC×100% IE表示抑制效果，DC表示负面控制的病斑的直径，DS表示样品病斑的直径。速克灵用于正面控制，乙酸乙酯和水用于负面控制。试验重复三次。 盆栽试验 使用5-7片叶并且生长环境一样的番茄幼苗。对保护效应来说，在番茄幼苗上喷洒不同浓度的FBE，在叶片干了之后，喷洒溶于2%蔗糖溶液的灰霉菌孢子，在24小时内喷洒3次，并在接种后的24小时内保持湿润