丙型肝炎病毒f 蛋白缺失对病毒复制及感染性的影响 - 生物化学与生物 .pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(2): 142~ 150 型肝炎病毒 蛋白缺失对病毒复制 F 及感染性的影响* ** ** 文博 许 刚 王岩 陶清源 任 浩 戚中田 ( 二军医大学微生物学教研室，全军生物侦检与防护重点实验室，上海市医学生物防护重点实验室，上海200433) 摘要 探索了F 蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响 利用定点突变方法， 将J6JFH1 的核心基因引进5 个终止密码子以中断F 蛋白的表达，从而获得F 蛋白缺失的病毒复制子J6JFH 1/ F 体外制备 RNA 转录体，并电穿孔转染Huh7.5.1 细胞，采用免疫荧光、实时荧光定量PCR 方法以及病毒感染等方法，观察F 蛋白缺失 对病毒复制、蛋白质表达及转染细胞上清感染性病毒颗粒产生的影响 在此基础上，构建5 个单一突变病毒体，对HCV 核 心蛋白进行二级结构分析，观察核心蛋白二级结构对HCV 复制和翻译的影响 结果显示，转染48 h 后，J6JFH 1/ F 与野生 型J6JFH1 相比，J6JFH 1/ F 转染阳性细胞数明显降低，细胞内HCV RNA 水平降低约95%，J6JFH1/ F 转染后不同时间点细 胞上清中HCV RNA 拷贝数和病毒颗粒也明显降低 5 个单一突变体不影响核心基因二级结构，病毒在细胞内复制和感染性 与野生型水平一致 J6JFH 1/ F 所产生的改变可能是由于5 处突变导致核心基因二级结构改变而造成的 结果说明，HCV F 蛋白缺失不影响病毒的复制翻译及病毒颗粒的包装释放，核心蛋白二级结构的改变对病毒复制和翻译则产生较大影响 关键词 丙型肝炎病毒，F 蛋白，核心蛋白，二级结构，病毒复制 学科分类号 R373 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 11.00272 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus ，HCV) 属于 型影响，HCV 1a 型8～11 位密码子处 1 移码翻译 + [1] [9] 病毒科，是有包膜的单正链RNA 病毒 HCV 感 可产生一种约 17 ku 的蛋白质，称为Core +1/F 染是引起慢性肝脏疾病的主要病因之一，可发展为 在HCV 1b 型中 种移码突变主要产生在42 位密 脂肪肝、肝硬化以及肝细胞癌[2-4] HCV 一般通过 码子处，并可能在144 位产生 1 位的回复突变， - [5] 即N 端和C 端的氨基酸序列是HCV 核心蛋白，中 血液或血制品传播 ，全球HCV 感染者约有 1.7 亿，而每年约有 10 万人发展为肝癌[6] 目前HCV 间区域为F 蛋白的嵌合体形式[13-14] 另外，最近研 [7] 苗尚未研发成功 ，且唯一的治疗方案——