a 型流感病毒m2 膜蛋白两亲性螺旋构象变化的fret 研究.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2016, 43(8): 796~800 流感病毒 膜蛋白两亲性螺旋 A M2 构象变化的FRET 研究* 李俊北 仇晓琰** ( 州大学药学院，江 省重大神经精神疾病诊疗技术研究重点实验室，苏州215000) 摘要 A 型流感病毒膜质子通道M2 是一个重要的抗流感药物靶点，其通道功能与蛋白质构象变化紧密相关 M2 跨膜螺旋 结构与功能的研究已经取得了显著进展，但其膜内碳端两亲性螺旋的构象变化与M2 功能的关系尚不明确 在这个两亲性螺 旋中引入能与跨膜域色氨酸形成福斯特共振能 转移(FRET)作用的非天然氨基酸PheCN，以便研究通道激活或抑制后M2 蛋 白膜内部分的构象变化 在酸性环境通道激活的条件下，两亲性螺旋与跨膜螺旋间的距离增大，其增大幅度基本不受药物抑 制通道活性的影响 由此推测两亲性螺旋的构象变化与通道活性无关，反而很可能与M2 在病毒出芽过程中的作用相关 关键词 M2 质子通道，两亲性螺旋，构象变化，荧光强度 学科分类号 Q5，R9 DOI: 10.16476/j.pibb.20 16.0078 A 型流感病毒的膜蛋白M2 是97 个氨基酸的 体的发射荧光强度减弱 多功能多结构域蛋白，其膜内部分由一个跨膜螺旋 M2 跨膜螺旋中的W41 是高度保守的，而非天 和一个碳端的两亲性螺旋组成，两者间的链接处于 然氨基酸对氰基苯丙氨酸(PheCN) 既具有与Phe 类 无规卷曲状态 仅仅由跨膜螺旋形成的四聚体就已 似的理化性质，又能够作为色氨酸的FRET 供体 [1] 经具备质子通道功能 ，可以被酸性环境激活， 两亲性螺旋上的单个氨基酸突变，例如54 位上的 是金刚烷胺(amantadine ，amt) 和金刚烷乙胺 突变，通常对M2 功能全无影响[3, 13] 54 位上的氨 [2] 基酸侧链既可以是体积很大的带电荷基团， 可以 (rimantadine ，rmt) 的药物靶点 ；而两亲性螺旋在 [3] 是体积很大的疏水性基团( 图1)，因此可以容忍 病毒出芽过程中起着关键作用 早期的M2 结构 研究集中在其跨膜螺旋部分，这部分的构象随磷脂 Phe 到PheCN 的突变 核磁共振结构显示，F54 和 组成、pH 及药物结合的变化而改变[4-7] 核磁共振 距离最近的 W41 之间的 C琢 距离为 13魡，而 [8-11] PheCN-W 之间的 为 16 [14] ，所以将F54 突变为 和X 射线衍射法提供了很多结构细节 ，却很难 R 0 魡 用于研究通道激活后处于快速平衡中的多个构象状 PheCN 后，PheCN54 和 W41 可以发生很强的 态，因此我们选择用荧光的方法进行构象研究 FRET 效应 PheCN 的 子产率对于外界环境的影 [15] 福斯特共振能量转移(f rster resonance energy 响相对不敏感 ，因此其荧光强度的变化可以直接 transfer，FRET)技术是检测生物大分子纳米级距离 反映跨膜螺旋和两亲性螺旋之间距离的变化 和纳米级距离变化的有力工具，其原理是基于荧光 基团供体和受体间的能量转移 发生FRET 的必要