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石河子大学动物科技学院本科毕业论文 四种培养基对猪肺炎支原体 培养效果的比较 院 （系）： 动物科技学院 专 业： 动物医学 学 号： 2009133951 姓 名： 周 琴 指导教师：李劼 （副教授） 新疆 石河子 20136月 摘 要 为猪肺炎支原体培养的最培养，本试验利用CCU方法和PCR法，对四种常用的培养基Goodwin等复合培养基、驴血清培养基、A26培养基KM2培养基进行猪肺炎支原体效果比较验。结果：Goodwin等复合培养基、驴血清培养基、A26培养基及KM2培养基变色单位分别10-5CCU/mL、10-CCU/mL、10-CCU/mL、10CCU/mL；PCRGoodwin等复合培养基KM2培养基驴血清培养基A26培养基Goodwin等复合培养基KM2培养基培养猪肺炎支原体。猪肺炎支原体；种培养基；培养效果；比较 Abstract respectively. We found that Mycoplasma hyopneumoniae in Goodwin complex medium and KM2 medium growth better by PCR detection, while in the donkey serum medium and A26 medium, the growth is undesirable. The finding of this study provide the evidence that Goodwin complex medium and KM2 medium are the best medium for the isolation and culture of Mycoplasma hyopneumoniae. Key words: Mycoplasma hyopneumoniae; 4 kinds of media; training effect; comparison 目 录 1 材料及方法 1 1.1 材料 1 1.1.1 试验菌株 1 1.1.2 主要仪器设备 1 1.1.3 主要试剂 1 1.2 方法 1 1.2.1 颜色改变单位(CCU)法计数 1 1.2.2 PCR方法检测 2 1.2.3菌落形态观察 2 2 结果与分析 2 2.1 CCU计数结果 2 2.2 PCR检测结果 3 2.3 菌落形态观察结果 3 3 讨论 4 参考文献 6  四种培养基对猪肺炎支原体分离效果的比较 猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneymoniae,Mhp）是引起猪支原体肺炎（MPS，又称“喘气病”）的病原。猪肺炎支原体的培养研究一直以来都没有较大的进展，支原体由于基因组小，生物合成能力较弱，营养要求较高，无细胞培养时营养要求苛刻，给猪支原体肺炎的诊断和防控带来了很大的困扰。 现在常用的离体培养基主要有Goodwin等复合培养基、驴血清培养基、A26培养基及KM2培养基，本试验4种基培养猪肺炎支原体效果的比较，为猪肺炎支原体的培养提供参考依据。 1 材料及方法 1.1 材料 1.1.1菌株 试验用菌株购自南京天邦生物科技有限公司猪支原体肺炎活疫苗（168株）。 1.1.2 主要仪器设备 电热恒温鼓风干燥箱、冰箱、座式自动电热压力蒸汽灭菌器、隔水式恒温培养箱、双人操作无菌操作台、W201S型恒温水浴锅、0.45μm一次性针式过滤器、电子天平、TC-512PCR仪（英国TECHNE）、XTS30-DPC数码摄像体视显微镜、二氧化碳培养箱等。 1.1.3 主要试剂 Hank’s液、水解乳蛋白溶液、Goodwin等氏复合培养基(简称GW培养基)、A26肉汤培养基(简称A26培养基)、驴血清培养基KM2培养基()。 10×Buffer，10mM dNTPs，Taq酶，ddH2O等。 1.2 方法 1.2.1 颜色改变单位(CCU)法计数 将1瓶活疫苗用灭菌水稀释，分别等量接入到四种液体培养基中进行传代培养，传2～3代；将四种液体培养基分别分装于6只无菌试管中，每管3.6mL；取第3代培养的菌液400μL接入第一只试管中，充分混匀，从中吸取400μL加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，从吸弃400μL混合菌液。于37℃恒温箱培养，培养5天后，每天观察记录情况。1.2.2 PCR方法检测 采用PCR技术检测猪肺炎支原体在四种培养基中生长情况。 参考文献[]合成1对Mhp ldh 引物，上游引物p1为：5′-CCGTTGAAGCCTT- GCTGTAT-3′，下游引物p2为：5′-CGGTTAGTGTCTCCCGTTATG-3’，扩增片段大小为287bp。引物由