药用植物金果榄组织培养初探.docVIP

　　药用植物金果榄组织培养初探 潘丽梅１，马小军２，白隆华１，曾雯雯３，冯世鑫１，莫长明１ （１．广西药用植物园，南宁 ５３００２３；２．中国医学科学院／北京协和医学院药用植物研究所，北京 １００１９３； ３．广西大学农学院，南宁 ５３０００４） 摘要：以金果榄（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ ｃａｐｉｌｌｉｐｅｓ Ｇａｇｎｅｐ．）幼嫩茎段为外植体，添加不同浓度的６－苄基腺嘌呤 （６－ＢＡ）、吲哚－３－丁酸 （ＩＢＡ）、萘乙酸（ＮＡＡ）、激动素（ＫＴ）、赤霉素（ＧＡ），研究不同培养基对金果榄试管苗诱导、增殖和生根的影响。结果表明，金果榄启动培养的最佳培养基为ＭＳ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ＫＴ ＋０．１ ｍｇ／ Ｌ ２，４－Ｄ，腋芽诱导率达９５．１％；增殖的最佳培养基为ＭＳ＋０．５ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＧＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，增殖系数达到１６．１；生根的最佳培养基为１／２ＭＳ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ ＋０．４ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，３０ ｄ时生根率为８５．４％，10 d后炼苗移栽到塘泥和河沙（３∶１，体积比）的混合基质中，３０ ｄ后移栽成活率可达８７．３％以上。 .. 关键词：金果榄（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ ｃａｐｉｌｌｉｐｅｓ Ｇａｇｎｅｐ．）；茎段；组织培养；诱导；生根 中图分类号：Ｓ５６７．２３文献标识码：A：0439－８114（２０15）05－1232-03 ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．0５．０51 收稿日期：２０１４－０８－１４ 基金项目：广西科学研究与技术开发计划应用基础研究专项（桂科基０７３１０３８） 简介：潘丽梅（１９８２－），女，广西藤县人，助理研究员，主要从事药用植物组织培养研究，（）０７７１－５６１０４６２（电子信箱）ｐｌｉｍｅｉ２００６＠１６３．ｃｏｍ； 通信，冯世鑫，研究员，主要从事药用植物栽培（）０７７１－５６１０４６２（电子信箱）ｓｈｉｘｉｎ１９９６＠１２６．ｃｏｍ。 金果榄（Ｔｉｎｏｓｐｏｒａ ｃａｐｉｌｌｉｐｅｓ Ｇａｇｎｅｐ．）为防己科青牛胆属常绿缠绕藤本植物，主产于四川、湖南、广西、湖北、贵州等地，具有清热解毒、利咽止痛的功效，主治咽喉肿痛、痈疽疔毒、泄泻、痢疾、脘腹热痛等［１－３］。金果榄块根含掌叶防己碱（Ｐａｌｎｍｔｉｎｅ）和咖伦宾（Ｃｏｌｍｔｆｉｆｉｎ）、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、千金藤碱、蝙蝠葛碱和木兰花碱［４－６］等成分，民间广泛用于治疗胃痛。现代药理学研究表明，金果榄有明显的抗炎镇痛、抗菌、抗肿瘤、降血糖、抗应激及解毒等作用，又被喻为可替代抗生素的天然药物［５］。由于长期采挖，金果榄野生资源日趋枯竭，人工种植和抚育势在必行。另外，金果榄雌雄异株，授粉受到环境影响极大，自然结实率低。在资源调查和引种中发现，雄株远多于雌株（约５０∶１），结果机会大大减少，且种子有明显的休眠期，发芽率较低［７］。因此，种源缺乏是金果榄资源锐减的主要原因。目前，金果榄扦插繁殖未获得成功，而组织培养快速繁殖是现代生物技术，且在香蕉、罗汉果、石斛等作物上已取得成功［８－１０］，并应用于生产，但金果榄组培繁殖研究鲜见报道。利用ＭＳ培养基为基础培养基，添加不同浓度和不同种类的激素，在多种植物组织培养中已获得成功。本试验以金果榄的幼嫩茎段为外植体进行消毒，用不同类型植物生长调节物质对丛生芽进行诱导、增殖、生根培养，分析各种植物生长调节物质对金果榄组织培养的影响，从而为金果榄人工繁殖和大规模推广栽培提供有利依据。 １ 材料与方法 １．１ 材料 本试验以广西药用植物园科研圃栽植的金果榄多年生幼嫩枝条为外植体材料。 １．２ 方法 １．２．１ 材料处理 将生长旺盛、无病虫害的金果榄多年生幼嫩枝条剪下，剪成１．５～２．０ ｃｍ长且带芽的茎段，放入０．１％的洗涤剂中浸泡８～１０ ｍｉｎ，然后于自来水下冲洗２０ ｍｉｎ，取出放入经高压灭菌的无菌水中润洗２次。经以上处理后，再将外植体放入７５％的乙醇中消毒３０ ｓ，然后放入０．１％的ＨｇＣｌ２溶液中消毒７ ｍｉｎ， 无菌水冲洗５次。用无菌滤纸吸干材料上的水分， 选择不变色、无褐化的茎段横切成面积为０．８ ｃｍ ×１．２ ｃｍ 的带芽小块，供接种用。 １．２．２ 培养方法 １）启动培养。将经过消毒处理的茎段分别接种在添加了不同组合、不同浓度生长激素的ＭＳ培养基上进行启动培养，生长素的类型及浓度为６－ＢＡ（０．５、１．０、１．５ ｍｇ/Ｌ）、ＫＴ（0.5、1.0、1.5 ｍｇ/Ｌ）、２，４－Ｄ（0、０．1、1.5 ｍｇ/Ｌ），每瓶接种１个茎段，每个处理接种２０瓶，３次重复，培养３０ ｄ后观察记录诱导效果。 ２）增殖培养。将在启动培养基上成功诱导出来的芽进行增殖培养，培养３