HPLC-MS-MS法测定人血浆中氨溴索浓度.docVIP

HPLC-MS/MS法测定人血浆中氨溴索浓度［摘要］ 目的 建立测定人血浆中盐酸氨溴索浓度的液相色谱质谱质谱联用法(HPLC-MS-MS)。方法 血浆中加入内标曲马多，经液液萃取后离心，取上清液吹干，再用甲醇复溶。色谱系统：SYMMETRYTM C18柱(150 mm×?3.9 mm，?5 μm)，流动相由20 mmol#8226;l-1乙酸铵水溶液∶甲醇(10∶90)组成，流速为0.6 ml#8226;min-1。质谱检测方式：多重反应监测(MRM)。用于定量分析的离子对分别为质荷比(m/z)379.0→m/z 263.9(氨溴索)和m/z 264.2→m/z 58.1(内标曲马多)。结果 盐酸氨溴索线性范围为0.1~400.0 ng#8226;ml-1，最低检测浓度为0.1 ng#8226;ml-1；标准曲线相关系数r≥0.99。结论 HPLC-MS/MS法具有专属、灵敏、准确、操作简单及快速的优点，可以用于测定人血浆氨溴索浓度。? ［关键词］ 盐酸氨溴索；液相色谱-质谱-质谱法；血浆? ［中图分类号］ R446.11；R917［文献标识码］ A［文章编号］ 1671-7562(2008)04-0282-03 盐酸氨溴索(ambroxol hydrochloride)又名盐酸溴环己胺醇，化学名为反-4- ［(2-氨基-3,5-二溴苯甲基)氨基］环己醇盐酸盐，是溴己新的体内活性代谢物。氨溴索是一种呼吸道润滑祛痰药，能促使呼吸道表面活性物质形成，调节浆液性与黏液性物质的分泌，增加中性黏多糖分泌，减少酸性黏多糖合成，并促进代谢，使呼吸道黏液理化性质趋正常，利于排出［1］。? 本实验参考国内外文献［2-3］，以曲马多为内标，旨在建立液相色谱-质谱-质谱联用(HPLC-MS-MS)测定人血浆样品中的氨溴索含量的方法，适用于该药临床口服给药的药代动力学和生物利用度的研究，为临床用药提供参考。? 1 资料与方法? 1.1 药品与试剂? 氨溴索和曲马多(内标)同为中国生物药品检定所生产，氨溴索批号：200301，纯度为99.5%；曲马多批号：171242-200302，纯度为97.9%。 甲醇为SK Chemicals产品，HPLC级；灭菌注射用水为安徽双鹤药业有限责任公司产品；乙醚、二氯甲烷、碳酸钠及乙酸铵均为中国医药(集团)上海化学试剂公司产品，均为分析纯。 空白血浆由苏州大学附属第二医院血库提供，于-30 ℃条件下冷冻保存。? 1.2 仪器及色谱条件? 测定仪器为API-4000三重串联四极杆质谱仪(Applied Biosystem Sciex，USA)，使用Agilent 1200高效液相色谱仪、电喷雾离子源(ESI)及Analyst 1.42数据处理系统；Drict-Q5超纯水机(Milli pore)；VORTEX-2涡旋振荡器；Heraeus低温高速离心机；AS7240B超声波振荡仪；Sartorius BP121S型分析天平和TECHNE DRI-Block DB-30氮吹仪。? 色谱条件：Waters公司SYMMETRYTM C18?(150 mm×3.9 mm，5 μm)色谱柱，Phenomenex Security Guard TM C18预柱；流动相由20 mmol#8226;l-1乙酸铵水溶液∶甲醇(10∶90)组成；流速为0.6 ml#8226;min-1；柱温为25℃；进样量为10 μl。? 质谱条件：电喷雾离子化源(ESI)；离子喷射电压：5 000 V；离子源温度：500℃；GS1：45 psi；GS2：?35 psi；碰撞活化气(CAD)压力：6 psi；气帘气(CUR)压力：20 psi；扫描方式为多重反应监测(MRM)；氨溴索和内标曲马多的解簇电压(DP)分别为56 V和?75 V；碰撞能量(CE)分别为30 eV和75 eV；用于定量分析的离子反应分别为质荷比(m/z)379.0→m/z 263.9(氨溴索)和m/z 264.2→ m/z 58.1(内标曲马多)。? 1.3 血浆样品处理? 取血浆样品100 μl，加甲醇20 μl、内标曲马多标准溶液(20 ng#8226;ml-1)50 μl、碳酸钠(?0.1 mol#8226;l-1)溶液100 μl、提取试剂(乙醚∶二氯甲烷=2∶1，v/v)3 ml，涡流混合30 s。振荡?2 min，离心?5 min?(6 000 r#8226;min-1)，取上清液于30 ℃下氮气吹干，残余物加150 μl甲醇溶解，取10 μl进行分析。? 2 结果? 2.1 特异性? 本试验所采用的HPLC-MS/MS条件，氨溴索保留时间3.28 min