临床血小板应用后血液促凝功能比较探究.docVIP

临床血小板应用后血液促凝功能比较探究【摘要】目的:比较冰冻血小板和新鲜血小板输注后血液的促凝功能。方法:该课题以100名志愿患者为研究对象,抽取其新鲜血液2ml后,随机输注50份冰冻血小板和50份新鲜血小板悬液,24小时后重新采血。分别经酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测冰冻血小板和新鲜血小板输注前后的β-血小板球蛋白(β thromboglobulin,β-TG)、血小板α-颗粒膜蛋白-140(granule membrane protein 140,GMP-140)和血小板第4因子(platelet factor 4,PF4)。采用Born氏比浊法检测冰冻血小板和新鲜血小板输注前后的聚集率,所用诱导剂的终浓度为花生四烯酸(arachidonic acid,AA)782.0 micro;mol/L、腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)47.6micro;mol/L和胶原(collagen)4.8mg/L。结果:冰冻血小板释放的β-TG、GMP-140和PF4分别为(51.5±4.4)ng/ml、(32.1±6.8)ng/ml和(25.5±4.9)ng/ml,新鲜血小板释放的β-TG、GMP-140和PF4分别为(40.3±4.0)ng/ml、(24.3±4.8)ng/ml和(18.8±3.6)ng/ml,冰冻血小板释放的β-TG、GMP-140和PF4均高于新鲜血小板(P215×1011,于当日采集后3h内输注,输注量为1个治疗量。采集出的新鲜血小板在无菌条件下注入浓度为4%～6%的二甲基亚砜,置于-8°C以下冰箱内保存即为冰冻血小板,保存期为半年。 1.2血小板输注 随机选择100名志愿输注新鲜血小板或冰冻血小板患者,输注前分别先抽取新鲜血液2ml。分别取50份冰冻血小板和50份新鲜血小板悬液,每份20单位。冰冻血小板输注前置42°C恒温箱解冻,经生理盐水洗涤。采用随机输注方法,输注24小时后再分别抽取新鲜血液2ml。 1.3β-TG、GMP-140和PF4检测 将输注前后分别抽取的新鲜血液,3000×g离心20min,取上清液,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosor -bent assay,ELISA)检测β-TG、GMP-140和PF4。试剂采用罗氏公司(Roche Diagnostics)的ELISA试剂盒,变异度分析控制在15%以内。 1.4血小板聚集功能 采用Born氏比浊法[5]检测输注前后血小板的聚集率,所用诱导剂的终浓度为花生四烯酸(arachidonic acid,AA)782.0micro;mol/L、腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)47.6micro;mol/L和胶原(collagen)4.8mg/L。 1.5统计学分析 数据按公式“促凝功能变化=输注后促凝功能-输注前促凝功能”,以x±s表示,采用SPSS软件包进行完全随机化设计资料的方差分析。 2结果 2.1输注前后冰冻血小板和新鲜血小板β-TG的表达情况 图1 冰冻血小板和新鲜血小板β-TG的表达情况 *:与冰冻血小板相比,P β-TG是血小板α颗粒合成的特异性蛋白,由四条肽链组成,通过抑制血管内皮细胞生成前列环素(prostacyclin, PGI2)而发挥促凝作用[7]。由于β-TG主要存在于血小板中,因此测定血小板释放的β-TG已成为反映血小板促凝功能的一项指标。GMP-140是血小板激活脱颗粒反应中α颗粒释放的遗留产物,在血小板被激活时被释放出来,可促进细胞之间的连接,具有介导活性血小板与内皮细胞相互作用的功能,在凝血过程中起重要作用。因而GMP-140也是反映血小板促凝活性的分子标志物之一[8]。PF4是血小板α颗粒中的另外一种活性因子,为四聚体糖蛋白,由相同的70个氨基酸单体以共价键结合,单体的相对分子质量为7800。每个单体的N末端具有可变区,单体通过此区以两个二硫键锚定在PF4蛋白质核心上,此区由3个非平行β折叠和一个α螺旋结构组成[9]。PF4在血小板粘附、聚集、活化时以蛋白多糖复合物的形式从血小板中释放,能降低内皮细胞表面硫酸乙酰肝素的抗凝作用,并使血小板聚集,促进血液在血管内皮细胞表面凝固,因此PF4也是反映血小板促凝反应的标记物[10]。我们的研究结果表明,机体输注冰冻血小板后释放β-TG、GMP-140和PF4多于输注新鲜血小板,说明输注冰冻血小板后机体的促凝功能强于输注新鲜血小板。 我们在实验中还发现,在AA、ADP和胶原分别作为诱聚剂的情况下,输注冰冻