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江苏部分地区农村妇女宫颈分泌物中衣原体及HPV检测[摘要] 目的 结合计划生育技术服务提供宫颈分泌物中沙眼衣原体(CT)、人乳头状瘤病毒(HPV)检测服务,了解农村妇女生殖道CT、HPV感染的情况。方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测226例已婚农村妇女宫颈分泌物中CT、HPV DNA。结果226例检测对象中CT阳性检出率为21.2%,HPV阳性检出率为14.2%,CT及HPV均阳性检出率为4.0%。80%以上的CT、HPV感染者阴道、宫颈无临床症状表现。结论对有性生活,特别是生活在农村的妇女提供常规的宫颈涂片检查、CT和HPV检测服务,有助于提高农村妇女的生殖健康水平。 [关键词] 衣原体;人乳头状病毒;聚合酶链反应;生殖健康 [中图分类号] R797.2[文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)34-113-02 生殖道感染(reproductive track infection,RTI)在妇科疾病中位居首位。引起女性生殖道感染的常见病原体有淋球菌(neisseria gonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)、解脲脲原体(M. urealyticum,UU)、人乳头状瘤病毒(human papillo- mavirus,HPV)和人巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV),其中CT、HPV的感染和女性子宫颈癌的发生有关。有研究[1]显示,96.6%的子宫颈癌患者的标本中检出HPV,CT可与HPV协同诱发宫颈瘤变[2,3]。RTI感染综合防治是目前计划生育技术服务机构开展的一项生殖保健服务项目,利用现有的计划生育技术服务网络,结合计划生育技术服务,指导和开展妇女生殖道感染相关病原体检测服务,对提高妇女的生殖健康水平、维护妇女的健康权益尤为重要。 1材料与方法 1.1研究对象 2007年9月～2007年10月在提供计划生育技术服务的过程中,对年龄相近、文化程度、经济水平相似,居住同一地区的已婚妇女226人的宫颈分泌物进行CT及HPV DNA检测。 1.2研究方法 1.2.1标本处理宫颈分泌物棉拭子于1.5mL生理盐水中洗涤片刻,15000rpm离心10min,弃上清,沉淀中加入40μL裂解液和2μL 10mg/mL蛋白酶K,搅匀后45℃水浴作用1h,稍后离心再100℃沸水浴5min,最后10000rpm离心2min,上清液作为模板DNA待检。 1.2.2CT PCR检测方法在0.5mL无菌离心管中加入PCR反应混合物25μL,反应体系的终浓度为10mmol/L Tris-HCl (pH 8.3),50mmol/L KCl,0.01%明胶,0.1% TritonX-100,1.5mmol/L MgCl2,各200μmol/L的dNTPs,各2μmol/L引物T1、T2,再加入Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 5μL,混匀后离心数秒,加无菌液体石蜡30μL,按下列程序扩增:94℃×3min预变性,94℃×60s-50℃×60s-72℃×60s,72℃×2min延伸,共35次循环。反应液中加入1μL溴酚蓝终止反应。 1.2.3CT测定向扩增产物中加入5μL上样液,混匀后取15μL加样于2%琼脂糖凝胶板上,60V恒压电泳30min后,在紫外光下可观察到一条517bp的清晰的DNA片段,即为阳性。 1.2.4HPV PCR检测方法在0.5mL无菌离心管中加入PCR反应混合物20μL,再加入Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 4μL,混匀后离心数秒,加无菌液体石蜡40μL,按下列程序扩增:94℃×2min预变性,94℃×30s-55℃×30s-72℃×60s延伸,共35次循环。反应液中加入1μL溴酚蓝终止反应。 1.2.5HPV测定取15μL反应液,加样于2%琼脂糖凝胶板上,5V/cm,恒压电泳30min后,在紫外光下观察结果,如407~412bp处出现橙黄色条带,则HPV为阳性。HPV-6,11,33型阳性产物为407bp;HPV-16,18型阳性产物为412bp。 2结果 2.1研究对象基本情况 226例妇女平均年龄为(44.56±3.13)岁,初潮年龄为(16.70 ±1.83)岁,妊娠数为(1.77±0.80)次,活产数为(1.10±0.33)例,人流数为(0.63±0.76)次。 2.2CT及HPV检出率 受检者中CT阳性检出率为21.2%,HPV阳性检出率为14.2%,CT及HPV均阳性检出率为4.0%。 2.3CT、HPV阳性对象生殖健康状况 CT阳性对象中阴道异常的比例为8.3%,宫颈异常为12.5%;HPV阳性对象