脑胶质瘤中Th1-Th2细胞因子表达及意义.docVIP

脑胶质瘤中Th1/Th2细胞因子表达及意义【摘要】目的：探讨脑胶质瘤Th1/Th2细胞因子不平衡表达状况及其意义。方法：逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测脑胶质瘤组织中以IL-2、IFN-γ代表的Th1类细胞因子和以IL-4、IL-10为代表的Th2类细胞因子的表达。结果：30例胶质瘤组织标本各细胞因子的阳性表达率为：IFN-γ 13.33%、IL-2 16.67%、IL-4 56.67%、IL-10 76.67%。Th1类细胞因子总的表达率为15%，Th2类为66.67%，Th2类细胞因子的表达明显高于Th1类（P0.05）。结论：脑胶质瘤存在明显的Th1/Th2失衡，可能与脑胶质瘤的发生、发展及免疫逃逸有关。 【关键词】脑胶质瘤；细胞因子 文章编号：1009-5519（2007）07-0984-03中图分类号：R73文献标识码：A 细胞因子的分泌与表达在肿瘤免疫中发挥重要作用。肿瘤发生时，细胞因子网络和肿瘤局部的细胞因子环境出现Th1/Th2 平衡失调[1]，监测Th1/Th2类细胞因子的变化能更好地反映机体的抗肿瘤免疫状态，从而指导临床治疗。本研究用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测脑胶质瘤组织中以IL-2、IFN-γ代表的Th1类细胞因子和以IL-4、IL-10为代表的Th2类细胞因子的表达情况，初步探讨脑胶质瘤Th1/Th2细胞因子不平衡状况。 1资料和方法 1.1一般资料：本组中30例患者均为本院神经外科2003年2月-2005年12月的住院患者，其中男18例，女12例，年龄7-62岁，平均40.3岁。经临床和病理证实为脑胶质瘤患者，所有患者术前均未接受过放疗、化疗及免疫治疗，病理分类按WHO新的胶质瘤分类分级标准（2000年）：多形性胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤为Ⅳ级；间变性少枝胶质细胞瘤为Ⅲ级；少枝胶质细胞瘤、星形细胞瘤为Ⅱ级；毛细胞型星形细胞瘤、黏液乳头状室管膜瘤为Ⅰ级。以10例脑疝减压术患者脑组织标本为对照。 1.2新鲜标本的处理：手术所取瘤组织及瘤旁组织约1 cm3，去除血管及坏死组织后Hanks液洗涤2次，剪碎经100目不锈钢网过滤后离心，淋巴细胞分离液分离单个瘤细胞，洗涤备用。 1.3检测指标及PCR引物：以IFN-γ、IL-2代表Th1类细胞因子，以IL-4、IL-10代表Th2类细胞因子，β-actin为内参照。引物序列见表1。 1.4RT-PCR：Trizol一步抽提法提取细胞总RNA。每例标本均同时检测β-actin和IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10 4种细胞因子，每管取等量细胞总RNA 6~10 μg，加入5×PCR buffer 8 μl，0.1 mol/L DTT 2 μl，dNTP 1 μl，M-MLV 1 μl（200 U），上下游引物各1 μl，总反应体积40 μl。37℃作用1小时后，95℃ 10分钟灭活M-MLV。M-MLV逆转录酶购自Gibco公司。聚合酶链反应（PCR）：每管取RT产物5 μl，10 μl,10×Buffer 8 μl，25 mmol/L MgCL2 2 μl，dNTP 1 μl，上下游引物各1 μl，Taq DNA聚合酶1 μl，总反应体积为50 μl。循环条件为95℃预变性5分钟，94℃ 1分钟，58℃ 1分钟，72℃ 1分钟，30个循环，最后72℃延伸7分钟。 1.5PCR产物检测：取第二步PCR产物8ul在1.5%琼脂糖凝胶上进行电泳，80V，UVP紫外凝胶分析系统分析电泳结果并摄像。 1.6统计学分析：实验所得数据用SPSS13.0统计软件处理，组间数据比较采用方差分析，P0.05）。 3讨论 Th细胞具有两种功能不同的亚群，Th1细胞分泌IFN-γ、TNF-β和IL-2，主要介导细胞免疫反应和迟发型超敏反应；Th2细胞分泌IL-4、IL-6、IL-9、IL-10和IL-13，主要介导体液免疫反应。机体处于正常状态时，Th1和Th2细胞功能亦处于动态平衡，以维持正常的细胞免疫和体液免疫功能[1,2]。若机体的Th1/Th2平衡被打破，将会引起各种病理生理变化[3]。肿瘤免疫应以细胞免疫为主，因此在抗肿瘤免疫中Th1类细胞因子应具有更重要的作用，但近年来研究发现肿瘤病人体内Th2型细胞因子模式占优势状态，而且肿瘤细胞本身也表现为Th2型细胞因子优势表达，这些细胞因子在肿瘤的发生过程中具有抑制和刺激双重效应，并认为机体处于Th2细胞因子优势状态是肿瘤免疫逃逸的一种机制，不利于机体组织以细胞免疫为主的抗肿瘤免疫反应[4]。 Yaamura等最先发现非小细胞肺癌、卵巢癌、肾癌、直肠癌以及淋巴瘤等患者在其外周血淋巴细胞和肿瘤淋巴细胞中均发生了Th2漂移。以肿瘤