利用木糖-葡萄糖为原料产乙醇酵母的筛选鉴定及发酵试验.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１０）：６９～７３ 利用木糖葡萄糖为原料产乙醇酵母的筛选、 鉴定及发酵试验 杨登峰　潘丽霞　关　妮　米慧芝　左文朴　黄日波 （广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心　南宁　５３０００３） 摘要　建立筛选利用木糖为碳源产乙醇酵母模型，获得一株适合利用木质纤维素为原料产乙醇 的酵母菌株。样品经麦芽汁培养基培养后，以木糖为唯一碳源的筛选培养基初筛，再以重铬酸钾 显色法复筛。通过生理生化和２６Ｄ１／Ｄ２区对筛选得到的菌株进行分析和鉴定，该菌初步鉴定为 Ｐｉｃｈｉａｃａｒｉｂｂｉｃａ。经过筛选得到的菌株 Ｙ２３以木糖（４０ｇ／Ｌ）为唯一碳源发酵时：生物量为 ２３．５ｇ／Ｌ，木糖利用率为９４．７％，乙醇终产量为４．５７ｇ／Ｌ；以混合糖（葡萄糖４０ｇ／Ｌ，木糖２０ｇ／Ｌ） 发酵时：生物量为２８．６ｇ／Ｌ，木糖利用率为９４．２％，葡萄糖利用率为９５．６％，乙醇终产量为２０．６ ｇ／Ｌ。Ｐｉｃｈｉａｃａｒｉｂｂｉｃａ是可以转化木糖及木糖葡萄糖混合糖为乙醇的酵母菌株，为利用木质纤维 素发酵乙醇的进一步研究奠定了基础。 关键词　乙醇　木质纤维素　筛选　鉴定 中图分类号　Ｑ９３９ 　　二十一世纪以来，“资源与环境”、“清洁能源、替代 维素，其中纤维素主要由葡萄糖构成，而半纤维素主要 能源”、“新能源、太阳能、生物质能”等新概念已经深入 由以木糖为主的五碳糖构成［２］，它们是自然界最丰富 人心。资源综合利用与环境保护是构建和谐社会以及 的可再生资源。目前应用于乙醇工业化生产的菌株主 可持续发展的永恒主题；能源问题亦成为世界关注的 要是酿酒酵母，而酿酒酵母本身不能利用木糖产生乙 焦点，并上升到国家的安全战略，控制一次性能源、开 醇，为了有效利用木质纤维素生产燃料乙醇，需要可以 发可再生能源和新能源、节约能源成为世界各国的国 利用木糖产乙醇的菌种。同时由于木质纤维素结构复 策之一。 杂，对纤维素和半纤维素进行有效分离，分别水解得到 　　由于石油等矿石能源的日益短缺，当今世界正处 葡萄糖和木糖，资源损失量大、工艺路线长、成本高。 于由矿石能源向可再生能源过渡的时期，可再生能源 因此，当前木质纤维素水解得到同时含有葡萄糖和木 替代矿石能源已经成为世界发展的必然趋势。由于石 糖等单糖的混合糖，是潜在的重要生物转化原料［３］。 油等矿石能源的价格日渐飞涨，可再生能源的优势日 本文通过从不同土壤环境中分离的酵母菌，建立筛选 益显现。现在许多国家都积极发展燃料乙醇产业，以 发酵木糖产乙醇酵母模型，并从自然界中筛选出能够 降低对石油的依赖。微生物利用木质纤维素生产燃料 利用木糖、木糖葡萄糖混合糖产乙醇的酵母菌种，为木 乙醇，被认为是一种利用这一廉价而又丰富资源的合 质纤维素转化为燃料乙醇打下良好的基础。 ［１］ 理方法 。 　　木质纤维素中含有较高的木质素和纤维素、半纤 １　材料与方法 １．１　土壤采集和来源 收稿日期：２００９０６０２　　修回日期：２００９０８１７ 国家自然科学基金、广西科技攻关项目（０５３７０１２）资 　　采集广西壮族自治区南宁市郊区６种不同区域和 助项目 生态类型的土壤，每份样品分别取５～１０ｃｍ深的３～５ 通讯作者，电子信箱：ｒｂｈｕａｎｇ＠ｇｘａｓ．ｃｎ 个穴的土壤混合，置于无菌封口