人移植胰岛低血管再生-溶氧电极.docVIP

人胰岛移植实验中的低水平血运重建 The Journal of Clinical Endocrinology Metabolism 2002, 87(12):5418-5423 IF=5.799 摘 要：胰岛移植后初期是无血管的。虽然胰岛会迅速进行血管再生，但是不能确定再生血管能否为移植胰岛组织产生充足的氧。我们测量植入裸鼠1个月后的老鼠或人胰岛的氧分压、血流量和血管密度。用Clark型微电极测量组织氧分压，用激光多谱勒血流仪测量血液灌注，而血管密度通过西非单叶豆凝集素（BS-1）染色的组织学标本来确定。老鼠和人移植胰岛的氧分压都只有内源性老鼠胰岛的15-20%。此外，移植胰岛的血管密度比内源性老鼠和人胰岛的血管密度都低。移植胰岛的血流灌注大约是肾皮质血流量的50%。发现在供者年龄和人移植胰岛的血流灌注之间存在负相关的关系，供者年龄和这些移植胰岛的总血管密度之间的相关性也类似。总之，与内源性胰岛相比，人移植胰岛的的血管密度和氧分压都显著降低。这可能对临床胰岛移植将产生深远影响，因为差的血管移植可能显著增加需要用来免用胰岛素的胰岛细胞数量。 最近介绍的Edmonton方案表示，大多数严格遵循特定标准进行胰岛移植的1型糖尿病病人可以达到不依赖胰岛素的水平，例如，一种无类固醇免疫抑制剂规则。但是，胰岛移植的主要障碍是可用的人胰岛组织供应有限。因此，器官培植中优化胰岛移植，降低治愈糖尿病病人的胰岛需求数目是非常重要的。尽管如此，很少有研究参与胰岛移植中是否存在充分的血管再生。通常胰岛有复杂的肾小球样血管结构，确保胰岛的任何一部分都不远离动脉血。此外，动物研究证明胰岛外分泌腺的血液供应明显要高，与肾皮质中一样（~5-7ml/min*g）。这种特有毛细血管网和高血液灌注对于胰岛细胞氧气和营养的高输送量、对于分泌激素有效的分散到它们的靶器官都是必须的。但是，移植前对胰岛进行分离和培养，胰岛的血管被破坏、脱分化或变性。移植后早期，胰岛只能通过扩散作用从周围组织的血管中获得氧气和营养。移植胰岛在7-14天内进行血管重建，但是动物研究提出的问题是：新形成的血管是否有能力充分满足胰岛细胞旺盛的代谢需要。我们以前的记录表明同源老鼠移植胰岛的氧压和血液灌注都明显降低。这种低氧压和低血液灌注是否也能应用于人移植胰岛还不知道。现在的研究目标是测量老鼠和人的胰岛移植入无胸腺裸鼠移植后的氧压和血管密度。另外，测量移植胰岛的血液灌注，用来调查人移植胰岛血管密度和血液灌注与供体年龄是否具相关性。 材料和方法 动物 胰岛分离和培养：在β-细胞移植中，分离来自7个心脏停博的供体的人类胰岛（Brussels）并空运至Uppsala。器官供体的平均年龄是40+5年（范围，19-35）。在Brussels用电子显微镜进行胰岛分离和胰岛细胞活力的描述（86+3%），进行胰岛细胞的成分（57+-4%胰岛素阳性细胞）和外分泌组织（1%）计数。到达Uppsala后，将胰岛放入添加5.6mmol//l葡萄糖、10%(vol/vol)小牛血清0.17mmol/l卞青霉素和0.17mmol/l链霉素的RPMI1640培养基培养4-6天。这种成分的培养基对人类胰岛培养最有利。 雄性C57BL/6小鼠的胰岛用胶原酶消化，在添加51.1mmol//l葡萄糖、10%(vol/vol)小牛血清0.17mmol/l卞青霉素和0.17mmol/l链霉素的RPMI1640培养基中培养4-7天，培养基每2天换一次。 胰岛移植：培养之后，用制动管吸取C57BL/6老鼠的200-250个胰岛或0.6微升人胰岛，注入用阿佛丁[2.5%(vol/vol)用10g97%(vol/vol)2,2,2-三溴乙醇与10ml2-甲基2-丁醇溶解]麻醉的C57BL/6老鼠左侧肾小囊下面。 测量内源性和移植胰岛的氧压：用阿佛丁麻醉动物，置于手术台上，维持37度的体温，切开气管。聚乙烯输尿管插入右侧颈动脉和左侧颈静脉。前面的输尿管与一个Statham P23dB压力传感器相连，用来监测平均动脉血压，而后面的输尿管用来连续灌注格林氏溶液（5ml/kg*h），来补偿体液的流失。 左肋下侧边缘进行切口，支撑移植物的左肾固定于一个塑料杯中。肾脏内塞入浸泡过格林氏溶液的棉絮，外面覆盖一层矿物油以防止蒸发和保持湿润和体温。用改良的Clark微电极测量移植胰岛和相临肾实质的氧压。在立体显微镜下通过显微操作器将Unisense微o2和血液灌注的平均值，在后面的统计计算中作为一个数据。P0.05时，所有的比较被认为有统计学意义。 结果 体重和血糖浓度：调查动物体重平均值为27.5+0.4g(n=22)。所有实验老鼠糖耐量正常，进行氧压和血流量测量时，血糖浓度为6.1+0.3mmol/l（n=22）。实验组老鼠体重和血糖浓度无差异。 组织氧压