肠道病毒尧乙脑病毒和腮腺炎病毒多重rt鄄pcr检测-生命科学研究.pdf

17 卷 2 期 生命科学研究 灾燥造援员7 晕燥援2 圆园13 年4 月 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Apr. 圆园13 肠道病毒 乙脑病毒和腮腺炎病毒多重RT PCR 检测方法的建立 * 孔祥军, 申镇维, 陈 虎, 赵连利, 于庆杰, 姬春雪, 李宝辉, 吴 蕊 （沧州市中心医院, 中国 北 沧州061001 ） 摘 要: 为建立针对肠道病毒 enterovirus, EV 冤尧 乙脑病毒 Japanese encephalitis virus, JEV 冤 和腮腺炎病毒 mumps virus, MUV冤的多重RT PCR 检测方法, 分别选择肠道病毒的5忆UTR 基因尧乙脑病毒的E 基因和腮腺 炎病毒M 基因设计3 对引物, 建立同时检测肠道病毒尧乙脑病毒和腮腺炎病毒的多重RT PCR 方法. 以中国地 区流行的与脑炎相关的麻疹病毒和风疹病毒cDNA 为模板验证该检测方法的特异性, 同时以梯度稀释的不同 滴度的脊髓灰质炎病毒尧乙脑病毒尧腮腺炎病毒评估该检测方法的检出限. 所建立的3 种病毒的多重RT PCR 方法可同时或分别特异扩 肠道病毒尧 乙脑病毒和腮腺炎病毒的 152 bp尧429 bp 和274 bp 基因片段, 基因序 列分别与脊髓灰质炎病毒Sabin 1 型5忆UTR 基因片段尧 乙型脑炎病毒SA 14 14 2 株E 基因片段及腮腺炎病毒 S79 基因片段序列一致; 检出限分别达到78.1 CCID /mL 尧312.5 PFU/mL尧156.2 CCID /mL; 而对麻疹病毒和风 50 50 疹病毒的扩增均为阴性. 所建立的多重RT PCR 特异性和检出限良好, 可用于上述3 种脑炎病毒的快速检测. 关键词: 多重RT PCR; 肠道病毒; 乙脑病毒; 腮腺炎病毒; 病毒性脑炎 中图分类号: R446.5 文献标识码: A 文章编号: 1007 7847 2013 冤02 0 136 07 Design and Construction of Multiplex RT PCR Diagnostic Methods for Enterovirus, Japanese Encephalitis Virus and Mumps Virus * KONG Xiang jun , SHEN Zhen wei, CHEN Hu, ZHAO Lian li, YU Qing jie, JI Chun xue, LI Bao hui, WU Rui （Cangz hou Central Hosp ital, Cangz hou 061001, Hebei, China） Abstract ：In order to develop a rapid, sensitive and specific multiplex RT PCR to simultaneously detect en terovirus (EV), Japanese encephalitis virus (JEV) and mumps virus (MUV), three sets of specific primers were selected and designed based on the alignment results of 5 忆UTR gene of EV, E gene of JEV and M gene o