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温度对培养心肌细胞力学特性影响摘要： ［目的］ 探讨温度对培养心肌细胞收缩特性的影响。 ［方法］ 通过培养1~3天龄的Wistar大鼠心肌细胞，用光电培养心肌细胞搏动传感器和生理记录仪记录、测定不同温度下心肌细胞的力学特性。 ［结果］ 从37 ℃降低到30 ℃，培养心肌细胞的力学特性逐渐降低，自主收缩频率（beat rate，BR）、主动收缩张力峰值（peak tension，PT）、张力上升最大速度（+dT/dtmax）、张力下降的最大速度（-dT/dtmax）和心肌细胞活动功率（power，P，P=PT×BR）分别降低到37 ℃状态的93.3%、33.6%、31.6%、37.7%和33.6%，39 ℃时其力学特性最高，BR、PT、+dT/dtmax、-dT/dtmax和P分别达到37 ℃状态的109.3%、124.9%、123.1%、128.4%和134%，达到40 ℃时，其力学特性则又降低，上述5项指标分别降低为37 ℃状态的97.4%、91.8%、90.4%、90.3%和90.7%。 ［结论］ 温度可明显影响培养心肌细胞收缩特性。 关键词：温度；心肌细胞；力学特性 文章编号:1006-3617(2007)01-0085-02 中图分类号:R114 文献标识码:A 肌肉的力学特性与环境温度关系密切，许多研究证实离体乳头肌在25 ℃~30 ℃时，收缩特性最好［1］，即收缩的主动张力和收缩、舒张速度最高。温度对自主性收缩的培养心肌细胞力学特性的影响未见报道。本实验用自制的光电培养心肌细胞搏动传感器，观察温度对培养心肌细胞力学特性的影响。 1 材料与方法 1.1 动物、药品和试剂 1~3天龄Wistar大鼠60只，雌雄兼用。实验分5组进行，即37 ℃对照组和4个温度组（30 ℃、35 ℃、39 ℃和40 ℃）。通过显微镜上的恒温调节装置调节温度，每组测试10个样本，显著性检验用配对资料的t检验。 培养基：Medium199，美国Sigma公司。 Hanks液（mmol/L）：NaCl 137，KCl 5.4，MgSO4 0.81，Na2HPO4 0.37，KH2PO4 0.34，CaCl2 1.3，NaHCO3 4.2及Glucose 5.0。粉红0.02 g/L，双蒸亚沸水配制，pH调至7.30，用G6型玻璃滤菌器抽滤灭菌后，4 ℃贮存备用。 D-Hanks酶消化液：胰蛋白酶（1:250，Sigma公司）用无钙-无镁Hanks液配成0.1%溶液，用1 mol/L NaOH调pH到7.3左右，抽滤灭菌后，-20 ℃贮存。 5-溴脱氧尿核苷（Brdu），Fluka公司产品，亚沸水配成10 mmol/L贮存液，醋酸纤维滤膜过滤除菌，-20 ℃保存。 特级新生小牛无支原体血清，56 ℃温育灭活30 min，分装后-20 ℃贮存备用。 含血清培养液组成：M199培养液，青霉素100 U/ml，链霉素100 μg/ml，临用前加入10%小牛血清。 1.2 实验仪器 二氧化碳孵育箱（SHEL-LAB，1824TC，USA）；倒置相差显微镜（Olympus，IMT-2，Japan），配有恒温调节装置（可准确无级调节温度）。心肌细胞搏动传感器：自制、已获专利ZL9316918.X。四道生理记录仪（日本光电公司）。 1.3 心肌细胞培养与心肌细胞力学特性测定 1～3天龄Wistar大鼠，在无菌条件下开胸取出心脏，将心脏放入冷Hanks液中洗去残血，剪成约1 mm3大小的碎块，用5～7 ml D-Hanks液消化酶，在37 ℃磁力搅拌消化10 min，弃上层悬液。随后重复消化5～6次，分别收集各次细胞悬液，加等量含10%小牛血清的M199培养液，离心（1 000 r/min，8 min），弃上清液，用培养液吹散沉淀细胞，同条件下再次离心，沉淀用10%小牛血清培养液制成细胞悬液，装入100 ml培养瓶。在37℃、5% CO2 1