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电针促进皮肤创伤修复实验探究(浙江中医学院基础医学系,杭州310053;成都中医药大学针灸推拿学院) 摘　要　动态观察了电针”足三里”对皮肤切割伤大鼠创伤修复过程中肉芽组织羟脯氨酸含量和胶原纤维灰度的影响。结果显示:电针可提高羟脯氨酸含量,使胶原纤维灰度上升。表明电针具有促进皮肤创伤纤维组织修复的作用。 主题词　电针　伤口愈合/针灸效应　羟脯氨酸/代谢　皮肤/损伤 以往的针刺研究表明,针刺具有抗创伤性休克,抗手术感染和抗创伤反应的功效,并由此推断可能有促进损伤组织修复的作用[1]。但是,有关针刺对皮肤创伤修复影响的研究尚未见报道。本实验通过连续观察电针对大鼠皮肤创伤修复过程中羟脯氨酸含量、胶原纤维染色及其灰度的影响,探讨电针在皮肤创伤修复中的作用。 1　材料和方法 1.1　实验动物及分组 SD大白鼠120只,体重180～220 g,雌雄各半,随机分为3大组,分别为:正常对照组(简称正常组);创伤模型组(简称模型组);模型电针组(简称治疗组)。每大组40只,再按治疗时间(依次为1,3,7,10,15天)随机分为5个小组,每小组8只大白鼠。 1.2　造模 参照文献[2,3]方法并做适当改进:术前用硫化钠脱毛,乙醚吸入麻醉,于背部正中大约T10～L1椎处消毒后做1 cm×1.5 cm的长方形切口,切除全层皮肤,消毒纱布压迫止血,术后动物自然清醒,单笼喂养,充足给水。 1.3　治疗 按《中国兽医针灸学》及人体取穴方法定位,选用30号1寸针灸针,针刺双侧”足三里”,进针约0.5寸,提插捻转后连接WQ?10 A型多用电子穴位测定治疗仪,波形为连续波,频率2 Hz。每日1次,每次15 min。正常组与模型组同步固定。 1.4　羟脯氨酸含量测定[4] 取创面组织1 cm×1.5 cm～0.1 cm×0.2 cm(依治疗天数逐渐减小),深达肉芽组织与肌肉交界处,称重,剪碎,放入15 ml螺口离心管中,加入2 ml 6 NHCl,置105 ℃恒温箱中24 h,冷却后调pH值到6,然后用蒸馏水稀释至10 ml,过滤后取1 ml待测。分别在空白管、标准管、测定管中加入双蒸水、标准液和水解液1 ml,依次滴加柠檬酸缓冲液、氯氨T、高氯酸、对二氨基苯甲醛,在60～70 ℃水浴中加热8 min后冷却,于波长561 nm处进行比色分析。 1.5　胶原纤维染色及其灰度分析 组织经10%中性缓冲甲醛溶液固定后,常规脱水、石蜡包埋,用Van Gieson苦味酸酸性复红法[5]染色,每张切片选4个视野于Mias 2000图像分析系统上进行灰度测定,计算平均值。 2　实验结果 2.1　羟脯氨酸含量测定结果 造模后创伤羟脯氨酸含量明显下降(P0.01);经电针治疗1天后,羟脯氨酸含量明显上升(P0.01);治疗3天后与模型组无明显差异;治疗7天后,羟脯氨酸含量再次升高(P0.01);而治疗10天、15天后有下降趋势。见表1。 2.2　胶原纤维染色及其灰度分析结果 镜下见胶原纤维被染成红色,肌肉组织、红细胞等呈黄色,胶原纤维排列不规则。灰度分析表明:造模后创面胶原纤维灰度明显低于正常组(P0.01);造模后1天,模型组与治疗组无胶原纤维,故二者灰度无法测到;造模后3天、7天,创面可见少量胶原纤维细丝,但模型组与治疗组间仍无明显差异;造模后10天、15天,治疗组胶原纤维灰度明显高于模型组(P0.01)。见表2。 3　讨论 3.1　中医对创伤的认识及相关研究状况 《金匮要略》将”金刃所伤”列为人体三大致病因素之一。明代薛己在《正体类要:”肢体损于外,则气血伤于内,营卫有所不贯,脏腑由之不和”,提示创伤对机体的影响不仅在于损伤的局部,而且会导致全身气血紊乱,脏腑功能失调。《血证论》曰:”今既破其皮肉,是犹壁之有穴,墙之有窦,缉盗而招之入也”,认为创伤后外邪容易入侵,这与西医的创伤后免疫抑制及并发感染的观点一致。卢和在《丹溪纂要》中提出”治损伤妙在补气血”,启发后世补益气血,提高机体防御机能是促进创伤修复的重要环节。 足三里属多气多血之胃经穴,具有补益气血、通调经络的作用。研究发现,电针”足三里”可提高创伤大鼠的免疫力,有效地对抗创伤后的免疫抑制[6]。有关针刺对实验性组织损伤的研究表明,针刺可缓解组织水肿,病理及超微结构观察提示针刺有促进损伤修复的作用[7],同时,针刺还可以促进动物骨折的修复[8]。此外,单纯微量直流电刺激不仅可促进创伤局部表皮细胞的再生和伤口的修复,而且对远隔部位亦有肯定的作用[2]。本研究综合电刺激与”足三里”的穴位功能,首次探讨电针对皮肤创伤修复的影响。 3.2　电针对羟脯氨酸含量的影响 胶原是构成创面纤维