硫酸铜对小鼠脾细胞DNA损伤探究.docVIP

硫酸铜对小鼠脾细胞DNA损伤探究摘要： ［目的］ 观察不同剂量硫酸铜作用不同时间对小鼠脾细胞DNA链断裂损伤的影响。 ［方法］ 采用单细胞凝胶电泳法（SCGE）分别测定小鼠灌胃1次染毒硫酸铜50、100、200 mg/kg和连续每天1次灌胃硫酸铜12.5、25.0和50.0 mg/kg 2周及连续灌胃3、6和12 mg/kg 1个月后小鼠脾细胞DNA 链断裂损伤情况。各染毒组均没相应的对照组。 ［结果］ 50、100和200 mg/kg硫酸铜1次染毒；25.0和50.0 mg/kg硫酸铜染毒2周；6和12 mg/kg硫酸铜染毒1个月后，脾细胞均出现DNA链断裂损伤的频率以及尾长均明显高于对照组。 ［结论］ 硫酸铜可引起脾脏细胞明显的DNA链断裂损伤，此损伤作用存在蓄积效应。 关键词：硫酸铜；脾细胞；DNA 链断裂 文章编号:1006-3617(2007)01-0080-03 中图分类号:R114 文献标识码:A 铜广泛存在于土壤和水中，其生物学作用具有双向性。一方面它是人类和动物的必需元素，为了维持机体的健康状态，体内需要维持一定水平的铜，如果机体出现铜缺乏，可能会出现多种损害；对于免疫系统而言，铜对于其某些组织的发育及免疫应答过程是必备的；另一方面，如果体内铜的水平超过一定的限度，也会产生毒性作用。铜盐的使用非常广泛，在工业方面可作为重要的化工原料、催化剂；在农业和养殖业，作为消毒剂使用；日常生活中也经常遇到用铜盐消毒的情况。此外，由于在各种仪器的装置中大量使用铜，这就不可避免的会进入人类的生活环境［1~3］。既往对铜过量毒性的研究主要关注在对肝脏和肾脏的损伤作用，较低剂量的铜即可引起明显的胃肠道黏膜刺激症状，其中恶心和呕吐是发生最早和频率最高的症状，在较高剂量时甚至引起溶血性贫血、肝衰竭、肾衰竭、休克、昏迷或死亡［4 ，5］。此外还有研究表明，铜具有致癌性和致畸性，但是研究结果并不一致［6］。本研究组已有的研究结果显示，100和200 mg/kg硫酸铜一次灌胃染毒对小鼠的B淋巴细胞增值能力产生抑制；200 mg/kg硫酸铜抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力；50、100和200 mg/kg硫酸铜染毒后24 h均能抑制小鼠NK细胞的杀伤活性。相关的研究还发现铜可以增加小鼠相关组织中的羟自由基增加，自由基以及氧化损伤会导致细胞的DNA链断裂损伤。本研究观察了在铜引起免疫功能抑制的剂量下，是否可引起免疫细胞的DNA链断裂损伤。 1 材料与方法 1.1 实验动物 清洁级BALB/c小鼠，雌性，6周龄，体重22～24 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。所有动物均食用由中国医学科学院实验动物部提供的饲料，自由饮水、进食。 1.2 染毒方式及剂量 将小鼠随机分组，每组5只，以灌胃的方式给小鼠染毒硫酸铜分以下各组：一次染毒的0、50、100和200 mg/ kg；1d1次分别染毒0、12.5、25.0和50.0 mg/ kg连续2周和0、3、6和12 mg/ kg连续1个月。均在最后1次染毒后24 h处死。 1.3 脾脏单细胞悬液的制备 将小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，剥去结缔组织，置于盛有Hanks 液的平皿中，用塑料针芯将脾脏在200目的不锈钢网中轻轻研磨，即成单细胞悬液。 1.4 单细胞凝胶电泳 将单细胞悬液与等量1 %低熔点琼脂糖混合，包埋在磨沙载玻片上，制成凝胶板，再将胶板裂解、解旋、电泳、中和，最后用碘化丙啶染色。在荧光显微镜下，使用590 nm的绿色激发光进行观察。记录每100个细胞中出现的彗星细胞数以及彗星细胞的尾长。 1.5 数据处理及统计分析 对DNA 链断裂损伤指标采用SPSS分析软件进行单因素方差分析。 2 结果 2.1 不同剂量硫酸铜一次性染毒脾细胞DNA 链断裂损伤情况 在硫酸铜一次性灌胃染毒24 h后，高、中、低剂量组的小鼠脾脏细胞出现DNA链断裂损伤的细胞频率及尾长与对照组相比明显升高（P 1