基因工程名词解释笔记.docVIP

1. 基因：基因是一种具有遗传功能的DNA序列，编码功能性多肽或DNA分子。 基因工程的定义：通过或者不通过载体，无论生物体是否独立，外源基因被转移到其他活细胞或有机体，创造出新的物种并克隆出很大数量的过程。 启动子：DNA分子上能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域。 2. 增强子：增强基因启动子工作效率的顺式作用序列，能够在相对于启动子的任何方向和任何位置(上游或下游)上都发挥作用。 3. 操纵子：转录的功能单位。很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列。 4. 基因工程的应用：a增强生物天然存在的功能b改变生物的基因型c特异性增强生物没有的功能d增强生物对外部伤害的抵抗能力e提供作研究材料生物的DNA和RNA序列f给人类和用于研究的生物体的基因组作用。 5. 基因工程中常用的酶：核酸酶（内切酶和外切酶）、连接酶、聚合酶、修饰酶、DNA结合蛋白 6. 星号活力：在极端环境下，如高PH或低离子浓度下，限制性内切酶特异性降低，会造成对许多位点的识别，产生许多不想得到的片段。 7. a同位酶：识别相同序列，但在不同位点切割。b同裂酶：识别序列及酶切位点均相同，但来源不同。C同尾酶：识别序列不同，但产生相同末端。 8. RE的特点：a在大多数细菌中发现b其基本作用是当破坏入侵DNA时作为一种保护机制的酶来保护自身的DNA c限制性修饰系统中的修饰能力，通过在识别位点进行修饰防止RE切割反射d在对称序列中进行切割e只能识别一小段序列，通常为4-6bps。F切割产生粘性末端g在DNA内部切割。 9. DNA pol I：5’-3’聚合酶活性、5’-3’外切酶活性（切除引物）、3’-5’外切酶活性（校正） 10. Taq：无3’-5’外切酶活性，用此错配率高，逆转录。 11. klenow fragment：无5’-3’外切酶活性。 修饰酶：常用的有碱性磷酸酶、末端转移酶。 12. 碱性磷酸酶，从5’端移除磷酸集团，防止载体自连。 末端转移酶（TdT），不需要模板进行DNA的合成，只是将核苷酸加到已知的DNA分子的3’-OH末端。 14.克隆载体的性质：1、分子量小，易于分离和纯化。2、有一个或多个限制性酶切位点3、有选择标记基因。4、有复制起始点和整合位点。5、易于转入载体。 15.低分子量质粒的有点：1、能容纳大分子量外源DNA2、便于操作3、常有高拷贝数4、含多个酶切位点的可能性低 16.质粒的性质：1、自我复制2、扩增3、可转移4、不相容 质粒作为载体的优点：1.易与宿主细胞分离2.分子量小，易容纳较大的外源DNA3.有两个以上的选择标记基因便于重组子的筛选和鉴定4.有一个复制起始位点5.可转入宿主细胞6.有一个或多个限制性酶切位点7.对于表达载体还要有启动子，增强子，SD序列，终止子 17.基因制备的方法：cDNA文库法、基因组文库法、PCR法、化学合成法、鸟枪法。 18.基因筛选的方法：应用核酸探针、应用差别杂交、应用mRNA差显技术、酵母双杂交、表达蛋白的特性、插入失活。 19.cDNA文库：是对不同生物的cDNA片段的收集，将每个cDNA片段克隆到一个载体上，便于纯化、贮存、分析，这些片段是由mRNA为模板，用逆转录酶合称双链cDNA，再接到载体上，转化到宿主细胞后建立的基因方法。 构建cDNA文库的步骤：1、cDNA的合成。2、mRNA完整性的检测。3、第一条链的合成。4、第二条链的合成。5、cDNA的尾部处理。 20.构建基因组文库的步骤：1、目的片段的获得2、克隆全部的外源DNA片段3、目的重组子筛选4、目的基因定位 21.基因组文库：代表一个生物整个基因组的所有DNA的重组克隆物的集合。 22.扣除杂交：　扣除杂交又叫扣除cDNA克隆，它是通过构建扣除文库得以实现的。它的本质是除去那些普遍共同存在的、或是非诱发产生的cDNA序列，从而使欲分离的目的基因的序列得到有效的富集，提高了分离的敏感性。 23.PCR（聚合酶链式反应） 特点：（1）用单链dna为模板合成互补链，其方法与细胞内DNA复制相似。 （2）首先单链DNA不需要纯化，因为PCR有两个引物，结合到DNA特定位点。 （3）两个引物之间的DNA片段通过DNA聚合酶作用而精确复制。 （4）共有3个步骤，即变性，退火，聚合 步骤：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA 　　 2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 　　 3.聚合（60℃-70℃）：在耐高温的DNA聚合酶下进行扩增。 基本成分：模板链，dNTP，含Mg2+的缓冲液，耐高温的DNA聚合酶，引物。 引物设计：1.长度18—30bp。