大口黑鲈Myf5基因cDNA和基因组序列的克隆与分析.pdfVIP

第15卷第4期 中国水产科学 VO1．1 5 N0．4 2008年7月 Journal of Fishery Sciences of China JU1Y 2 00 8 大口黑鲈MyfS基因eDNA和基因组序列的克隆与分析 郭玉函1,2白俊杰 ，劳海华 ，叶星 ，罗建仁 (1．中国水产科学研究院珠江水产研究所，中国水产科学研究院热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室，广东广州 510380；2．上海海洋大学生命科学与技术学院，上海200090) 摘要： 是生肌调节因子家族成员之一。为研究该基因在大口黑鲈 (Micropterussalmoide)肌肉生长发育中的作用，运 用RT-PCR和RACE技术获得大口黑鲈 cDNA序列1 093 bp，其中开放阅读框长723 bp，编码240个氨基酸，经分析 该蛋白无信号肽序列，属核蛋白，含有一典型的碱性螺旋一环一螺旋结构域。使用Genomewalker技术获得启动子区序列 2 690bp，预测含有肌肉特异性转录调控相关元件：E．框、肌细胞特异增强子2(MEF2) 核转录因子1(SP1)、上游激活因 子(USF)、血清应答因子(SRF)等结合位点。含有早期生长应答因子 (EGR 、早期快反应生长应答因子1，2(EGR-1，2) 等结合位点，它们可能是 能够在体节形成早期表达的主要原因。获得 3个外显子与2个内含子序列，内含子1 中存在一个在不同鱼类中高度保守的长度为123 bp的序列，推测参与调节了Myf5基因的时空和组织特异性表达。本研 究旨为进一步研究该基因对大口黑鲈肌肉生长发育的作用机理奠定基础。[中国水产科学，2008，15(4)：568—576] 关键词：肌肉； 基因；调节；大口黑鲈 中图分类号：Q959 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2008)04—0568—09 生肌调节因子家族 (Myogenic regulatory factors， 时期的表达模式已经建立。在虹鳟 (Oncorhynchus Ml~s)基因的表达决定了骨骼肌肌细胞的命运。该 mykiss)的胚后生长发育中，Myf5基因的表达水平 家族属转录因子家族，包括Myf5、MyoD、myogenin 与肌肉的阶段性生长成明显的相关性 。不同于 和MRF4 4个成员，均存在碱性螺旋一环一螺旋结 哺乳动物，大多数鱼类肌肉生长发育往往持续一 构域…。通过该结构域它们能够与E蛋白形成二 生¨ ，而其肌肉生长发育的状况决定了鱼体的最 聚体，再与肌肉特异性基因如肌球蛋白轻链和肌酸 终大小 引，深入研究鱼类肌肉生长发育的机制有 激酶等基因的上游调控序列E—box结合，从而激活 利于提高鱼类的养殖效率。目前，已有鲤 (Cyprinus 这些基因的表达 _ 。 carpio)、虹鳟、大西洋鲑 (Salmo salar)和青斑河纯 Myf5是该家族最早表达的基因，在成肌细胞 (Tetraodon nigroviridis)的Myf5 cDNA序列及斑马 的特化和增殖过程中发挥了关键的调节作用。人 鱼、条纹狼鲈、花鲈、褐牙鲆和红鳍东方纯 (Takifugu 类Myf5基因最早发现于1989年，能够诱导鼠的 rubripes)的Myf5基因组序列被克隆。 10T1／2C3H成纤维细胞分化为肌纤维 。Myf5 大口黑鲈，隶属鲈形目(Perciformes)、鲈亚 基因敲除实验中小鼠轴上肌肉系统发育迟缓并死 目(Porcoidei)、太阳鱼科 (Cehtrachidae)、黑鲈属 于肋骨缺陷症，说明Myf5基因起始调控了轴上 (Micropterus)。原产于北美密西西比河流域，自20 肌肉的形成[6-9]。在胚胎时期阻碍斑马鱼 (Danio 世纪80年代引入中国后已成为中国重要的淡水养 rerio) 基因的表达，体节形成与肌肉发育