转基因食品的发展历史与未来趋势.docVIP

河北科技师范学院食品科技学院 课程论文 课程名称：转基因食品与安全 论文名称：外源基因表达的检测方法 作者名称：姚金超 学 号： 0613090125 班 级： 酿酒0901 2012年 04 月 17 日 外源基因表达的检测方法 学号：0613090125 姓名：姚金超 摘要：转基因技术是指利用生物技术，将外源基因转移到其他物种中去，从而改造生物的遗传特性，使其在性状、营养品质等方面向人类所需的目标转变。转基因食品即利用分子生物学手段，将某些生物的基因转移到其它物种中去，使其出现原物种不具有的性状或产物，以转基因生物为原料生产和加工的食品称为转基因食品，又称基因工程食品或基因修饰食品(简称GM食品)，转基因作物食品就是以转基因作物为原料生产和加工的食品。[9.10] 随着转基因产业的飞速发展，转基因食品在社会生活中所占的地位越来越重，对人类的影响越来越大，其受到的关注也越来越多。转基因产品中外源基因的表达产物可以改变食品的结构，及其营养成分，甚至可能产生一些有毒物质，可能对人体或环境产生危害，为保证转基因食品的安全性，需对其外源基因的表达产物进行检测，本文主要以基因芯片技术、PCR技术、蛋白质组等一些国际先进技术从核酸和蛋白质水平对转基因食品进行检测，以确保其安全性。 关键词：基因芯片技术、PCR技术、蛋白质组、ELISA、外源基因 前言 随着生物科技的飞速发展，基因工程技术在食品领域中已得到广泛应用。人们利用基因工程技术将某些生物的基因转移到其他物种中去改造其物种的遗传特性，并使其性状、营养价值、物种品质向人们所需要的目标转变，如改变植物中蛋白和淀粉的含量、改善外观和口感、提高产量、增强对病虫害和干旱的抗性甚至抗癌病等；由此产生的作物被称为转基因作物，利用转基因作物生产出的食品被称为转基因食品（Genetically Modified Foods，GMFs）。从 1983 年全球第一种转基因马铃薯的出现到现在 20 多年的时间内，世界各国涉及研究的转基因作物已多达五千种左右。随着一些转基因作物如玉米、油菜、番茄等也逐渐进入人们的生活，有关转基因食品的安全性、伦理学以及环境污染的疑问也越来越多，20 世纪 90 年代开始出现对转基因作物中转基因成分进行检测。目前许多国家（包括欧盟）都制定了转基因产品的标示阈值，这使得转基因食品的检测技术也有了长足的发展，本文对转基因食品的检测方法进行综述。[6] 1、基于核酸的检测方法 1．1实时荧光定量PCR技术 实时荧光定量PCR技术(Real-time FluorescenceQuantitative PCR Detection)是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术。在该技术体系中，除了有两条普通引物即与目标DNA特异序列相结合的引物外，还有一条在5′和3′端分别标记了报告荧光染料基团(R)和淬灭荧光染料基团(Q)，并与PCR产物特异片段相结合的寡核苷酸探针。当探针完整时，R基团发出的荧光被Q基团所淬灭，一旦探针被切断，淬灭作用消失，R基团发出的荧光就可以被检测到。在PCR反应过程中，上下游引物与目标DNA的特异序列相结合，探针则与PCR产物相结合。在PCR延伸阶段中TaqDNA酶的5′—3′外切活性将探针水解，Q基团和R基团由于探针水解而相互分开，导致报告荧光信号增加。荧光信号的增加可被检测到，它是模板被PCR扩增的直接标志。通过采用一系列已知浓度梯度的标准样品，建立标准曲线，即可对待测样品进行定量检测。[3.4] 1．2印迹法 无论是鉴别外源 DNA 的 Southern 印迹法还是鉴别 RNA 的 Northern 印迹法，其基本过程到是将待测的核酸片段转印并结合到一定的固相支持物上，然后用标记的核酸探针检测待测核酸。 印迹法具有操作快速简单、可同时检测多个样本的优点，但由于对待测样品未进行扩增，所以其敏感度较 PCR 检测低。[6] 1．3基因芯片检测技术 基因芯片(Gene Chips)是将目前通用的报告基因、抗生素抗性标记基因、启动子和终止子等大量已知的特异片段探针分子，按照特定的序列方式固定于玻片、硅片或薄膜等固相载体上，形成的DNA微矩阵，标记的样品分子与位于微阵列上的已知序列按碱基配对原理进行杂交，通过激光共聚焦荧光检测系统检测杂交信号强度，计算机软件进行数据比较和综合分析，转化成不同样本中特异基因的丰度，获得样品中样品分子数量和序列特征等信息，从而判断待测样品是否为转基因产品，其最大不足是每种检测样品首先必须有与之相配的非转基因作物的芯片，成本高。但是，基因芯片技术由于同时将大量探针固定于支持物上，所以可以一次性对样品大量