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　　荧光标记DNA探针在原位杂交技术的使用技巧医学诊断 --荧光标记DNA探针在原位杂交技术的使用技巧医学诊断 虽然早在20世纪60年代末70年代初原位杂交技术就已经诞生毕业论文，但是当时采用的是放射性的DNA探针，存在人身安全及探针处理等问题。直至原位杂交技术开始使用荧光标记DNA探针，这才开启了荧光原位杂交（fluorescence in situ hybri-dization，FISH）的时代。荧光原位杂交技术是一种应用荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示DNA序列位置的方法。与传统的放射性标记原位杂交相比，FISH具有安全、快速、经济、灵敏度高、检测信号强、杂交特异性高、能同时显示多种颜色等优点，因此自该技术问世以来，发展迅速，并广泛应用于分子生物学、医学、细胞遗传学等许多领域。 1 FISH技术的原理及操作步骤FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸作探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因定位在染色体上，可以对待测核酸定性、定位或相对定量分析。FISH的基本操作步骤包括染色体制备、探针标记、将探针与实验材料靶序列杂交以及检测杂交结果。 （1）染色体制备。原位杂交的效率取决于探针与染色体的靠近程度，因此获得背