AKTmTOR信号通路在大鼠终板软骨细胞体外自然退变模型中的表达及意义.pdfVIP

生堡医堂盘查!!!!生!旦!旦筮堑鲞筮!塑盟型塑型』坠i!!：￡尘型!翌!：!!!!：!!!：堑：堕!：! ·375· ．基础研究． AKT／mTOR信号通路在大鼠终板软骨细胞 体外自然退变模型中的表达及意义 张书丰 王弘 张涛徐宏光 马明明 张晓玲 【摘要】 目的探讨AKT／mTOR信号通路在大鼠终板软骨细胞体外自然退变模型中的表达变 化及其意义。方法分离、培养大鼠终板软骨细胞，建立大鼠终板软骨细胞体外自然传代退变模型。 数字表法随机分为空白对照组(】)2代细胞)、自然传代退变组(P5代细胞)、P5代AKT／mTOR信号通 路抑制剂组、P5代AKT／mTOR信号通路激动剂组。倒置相差显微镜观察各组细胞的形态；甲苯胺蓝 染色检测各组细胞蛋白聚糖的变化；免疫印迹法检测AKT及P—AKT蛋白的表达变化；实时聚合酶链 反应检测各组细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9及AKT／mTOR信号通路中的关键基因roTOR基因表 达变化。结果随着大鼠终板软骨细胞的体外自然传代退变的进行，大鼠终板软骨细胞的表型逐渐 减少甚至丢失；在自然传代组中：Ⅱ型胶原(P5／P2=0．28，P=0．0427)、蛋白多糖(P5／P2=0．33，P= 0．026 3)、SOX9(P5／】)2=0．40，P=0．0182)及roTOR(P5／P2=0．28，尸=0．0381)的表达明显降低；在 AKT／mTOR抑制剂组中：Ⅱ型胶原(P5／P2=0．19，P=0．0347)、蛋白多糖(P5／P2=0．25，P=0．023)、 SOX9(P5／P2=0．31，P=0．0342)及mTOR(P5／I)2=0．20，P=0．0241)的表达较自然传代组降低；在 AKT／mTOR激动剂组中：及Ⅱ型胶原(P5／P2=0．41，P=0．0441)、蛋白多糖(P5／P2=0．53，P= 1)的表达较自然传代退 0．015】)、SOX9(P5／P2=0．61，P=0．0197)mTOR(P5／P2=0．41，，)=0．038 变及抑制剂组升高。结论AKT／mTOR信号通路可能在大鼠终板软骨细胞体外自然传代退变的过 程中有具有十分重要的作用，人为添加AKT／mTOR信号通路的抑制剂(LY294002)或激动剂(IGF一1) 可加速或抑制、减缓大鼠终板软骨细胞体外退变的发生。 【关键词】椎问盘；软骨细胞；信号传递；细胞衰老；AKT／mTOR 基金项目：国家自然科学基金，安徽省教育厅自然科学研究基金重点项目 (KJ2013A253) and ofAKT／mTOR innatural invitromodel Expressionsignificance signalingpathway degeneration of ofrats 7o．0，Xu Hang，ZhangHonggumtg，Ma endplatechondrocytesZhangShufeng’，Wang First IVan．nanMedical of ofspineSurgery，theAffiliatedHospital Mingming，ZhangXiaoling．‘Departmen．t 241000，China, Col如ge，Wuhu autlwr：Wangl-long，Em，ail：wangh，on9553@126．corn, Corresponding To the and ofAKT／m310R Objectiveinvestigateexpressionsignificance