成神经分化的骨髓间充质干细胞向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移研究.doc

　　成神经分化的骨髓间充质干细胞向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移研究 ：包普花, 王敏, 苏军, 刘孟宇, 张焕相 【摘要】 目的: 探讨成神经分化的骨髓间充质干细胞(BMSCs)向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移。方法: 采用碱性成纤维生长因子(bFGF)、 丁羟基茴香醚(BHA)、 二甲基亚砜(DMSO)联合诱导剂对BMSCs进行诱导分化, 通过免疫荧光染色检测诱导的细胞表达神经前体细胞标志物Nestin、 βIIITubulin和NSE的情况。运用Dunn chamber研究成神经分化的BMSCs向胶质瘤和SDF1α的迁移。结果: BMSCs能诱导分化成神经元样细胞, 而对照组的BMSCs形态无变化。Dunn chamber分析显示, C6细胞条件培养基组和SDF1α组诱导细胞的迁移速率和迁移效率明显高于对照组, 表明C6细胞条件培养基和SDF1α对BMSCs具有趋化作用, 单个细胞迁移轨迹实验也证实了这一结果。此外, 分化不同状态的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化程度也不同。结论: BMSCs的定向迁移与分化状态密切相关。 【关键词】 骨髓间充质干细胞; 分化; 迁移; 趋化性 　　[Abstract] AIM: To investigate the tropism of bone marroesenchymal stem cells (BMSCs) in neurogenic differentiation for glioma and SDF1α. METHODS: BHA, bFGF, and DMSO arkers, Nestin, βIIITubulin and NSE munocytochemistry. SCs in neurogenic differentiation toa and SDF1α. RESULTS: BMSCs could be induced to differentiate into neuronlike cells, ained the morphology of BMSCs. Dunn chamber analysis revealed that both the migration speed and efficiency of cells induced by C6 conditioned medium and SDF1α onstrating the chemotactic effect of both C6 conditioned medium and SDF1α on BMSCs. These results ed by examination of migration tracks of individual cells. Moreover, BMSCs at different states of differentiation sho for C6 conditioned medium and SDF1α. CONCLUSION: The directed migration of BMSCs is closely related to the differentiation states of these cells. 　　[Keyigration; tropism 恶性胶质瘤是目前最为盛行的脑瘤, 干细胞移植极有希望 治疗 胶质瘤。因骨髓间充质干细胞(bone marroesenchymal stem cells, BMSCs)体内体外均显示很强的胶质瘤趋化性[1], 所以应用BMSCs治疗胶质瘤即是很好的细胞治疗手段。然而处于不同分化状态的BMSCs, 尤其是成神经分化过程中的BMSCs能否改变其向胶质瘤趋化性迁移的能力, 还不得而知。众多研究表明, C6细胞分泌的多种细胞因子影响BMSCs的定向迁移, 如SDF1α。鉴于此, 本实验利用化学诱导剂联合细胞因子的诱导方法, 研究成神经分化的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移。 　 　1 材料和方法 　　1.1 材料 倒置相差显微镜购自日本Olympus公司、 CO2培养箱购自德国Heraeus公司、 恒温离心机购自法国Jouan公司、 35 mm培养皿和细胞培养瓶购自美国Coring costar公司。LDMEM培养基、 HDMEM培养基、 胎牛血清(FBS)均购自Gibco公司, 小牛血清(FCS)购自Hyclone公司, Percoll淋巴细胞分离液购自Pharmacia公司, 胰蛋白酶(Trypsin)、 EDTA、 碱性成纤维生长因子(basic fibroblast groethyl su