成纤维细胞生长因子受体3在脂多糖抑制成骨细胞分化中作用的初步研究.doc

　　成纤维细胞生长因子受体3在脂多糖抑制成骨细胞分化中作用的初步研究 ：杨京，赵子瑜，何启芬，陈林 【摘要】 目的 本实验拟通过研究激活成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)信号通路时骨组织成骨细胞分化程度在内毒素血症中的变化，为进一步阐明骨组织在炎症反应中变化的机制奠定基础。方法 8周龄雄性C57小鼠和FGFR3功能持续增强的软骨发育不全(Ach)小鼠各6只，分为脂多糖(LPS)组和生理盐水对照组，每组3只。LPS 15mg/kg或等量生理盐水腹腔注射4小时后取右侧胫骨提取RNA，定量聚合酶链式反应(PCR)检测白细胞介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、骨钙素(OC)的变化。LPS、碱性成纤维生长因子(bFGF)处理前成骨细胞系MC3T3E1 4小时后定量PCR检测IL6、TNFα、OC水平，成骨诱导7天后检测碱性磷酸酶(ALP)活性。结果 LPS刺激后，骨组织和MC3T3E1的炎症递质基因IL6、TNFα的RNA水平显著增加(Plt;0.01)，成骨标志性基因OC表达下调(Plt;0.05)。且Ach小鼠相应基因变化幅度显著高于C57的变化幅度(Plt;0.05)。MC3T3E1同时用LPS与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)处理组的IL6、TNFα、OC水平表达水平位于单独用LPS或bFGF组之间。成骨诱导7天后LPS处理组细胞ALP活性显著低于未处理组(Plt;0.05)，bFGF处理组显著增高(Plt;0.01)。结论 LPS刺激骨组织发生炎症反应、抑制成骨细胞分化。在整体动物水平持续性激活FGFR3信号通路加重上述反应，在细胞水平低剂量bFGF激活FGFR3减轻上述反应。 【关键词】 脂多糖;骨;成骨细胞;成纤维细胞生长因子受体3 　　Abstract： Objective This experiment focuses on the differentiation of osteoblasts in the endotoximia mation.Methods Six male C57 mice and 6 male Ach mice (persistently activating function of FGFR3),8 al saline(NS) group and lipopolysaccharide(LPS) group,3 mice per group.RNA the right tibias 4 hours after LPS or physiological saline injection,and then the levels of interleukin 6(IL6),tumor necrosis factor α(TNFα),osteocalcin (OC) in tibia and osteoblast easured by quantitative realtime PCR.Four hours after the preosteoblast cell line MC3T3E1 easured by quantitative realtime PCR.The MC3T3E1 activities of alkaline phosphatase(ALP) inistration(Plt;0.01).The expression change ore huge in Ach mice(Plt;0.05).The expressions of IL6,IL1 and OC in MC3T3E1 cultured mation and inhibit the differentiation of osteoblast.Persistently activating the function of FGFR3 in vivo could aggravate these effects.And log/kg (Sigma)或等量生理盐水腹腔注射4小时后取右侧全长胫骨，剔除肌肉、软组织后液氮保存备用。 　　2 细胞培养 　　前成骨细胞系MC3T3E1(购自北京协和细胞库)以含10%FBS(GIBCO)的αMEM(GIBCO)培养至融合后，以LPS 100ng/ml(sigma)、10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)(BD)、LPS100ng/ml+bFGF 10ng/ml分别处理细胞4小时后搜集细胞备用。另取融合细胞用成骨诱导液培养：含50μg/ml维生素C (sigma)、10mmol/L β磷酸甘油钠(sigma)、100nmol/L地塞米松(sigma) 的完全培养基。以100ng/ml LPS、bFGF10ng/ml、LP