新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究.doc

　　新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究 ：严泉剑 李六金 张宇梅 杨贵忠 刘海军 郭金龙 王禾 邵国兴 【关键词】 ,骨髓基质细胞 　　【Abstract】 AIM: To investigate the function parameters of tissue engineered bladders arroal cells（MSCs）. METHODS： The MSCs and the bladder-shaped accellular organ specific matrix (BAMG) the Ney. The animals ly assigned to three groups. Group A (n=6) underetry and radiography studies ed serially. Animals ed. RESULTS： The average time elapsed betarroplantation of the tissue-engineeredneobladders arked difference in bladder pliance (11%, 104%, and 107% respectively). Histologically, group C shoal cellular organization consisting of a trilayer of urothelium, submucosa and muscle. The Group A, B presented a pattern of normal urothelial cells ucosa and a thin layer of muscle fibers. CONCLUSION： Our study demonstrates that the MSCs can be successfully used in rabbits bladder augmentations and replacement by tissue engineering techniques. 　　【Keyarroal cells; bladder; transplatation; tissue engineerig 　　【摘 要】目的: 研究骨髓基质细胞（MSCs）在兔组织工程膀胱中的应用.方法:按文献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG)，从兔胫骨中分离出MSCs，体外扩增后接种于BAMG外表面，在低糖DMEM（LGDMEM）培养12 h，与BAMG复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代.20只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术.实验随机分为3组.A组6只直接缝闭三角区；B组7只用膀胱形状的BAMG进行重建；C组7只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术.术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料.12 L 10 mmol#12539;L-1 PBS (pH 70)和1 g#12539;L-1的叠氮钠搅拌6 h使部分细胞溶解.在50 mL含2000 Kunitz单位DNA酶（Sigma）的1 mol#12539;L-1 NaCl 溶液中振摇14 h, 重复3次.然后在50 mL 40 g#12539;L-1去氧胆酸钠盐（含1 g#12539;L1叠氮钠）中振摇6 h.获取的BAMG在PBS中洗3遍.4℃置于1 g#12539;L-1叠氮钠和100 g#12539;L-1硫酸新霉素中储存. 　　1.2 MSCs分离培养 全骨髓细胞获取（arroo龄实验用新西兰兔的胫骨穿刺点，即关节腔下10～25 cm 胫骨前缘处穿刺抽取骨髓［３］，注射器吹散，所获有核细胞计数.以(01~20) × 107#12539;mL-1 细胞溶于含100 mL#12539;L-1胎牛血清（FBS）的 低糖DMEM（LGDMEM）培养液 (GIBCO/BRL) 备用.内毒素水平低的FBS批次选择：置 55℃灭活1 h ，用于在琼脂糖凝胶上全骨髓细胞培养，1 L含100 mL#12539;L-1 FBS的 LGDMEM稀释后，置于 75 cm2 培养瓶(Falcon)，3 d后，移去一半培养液及未贴壁细胞，加入等量新鲜培养液，以后换液间隔为3~4 d， 细胞融合时收获细胞.收获细胞前移去培养基，用PBS洗两遍.然后用4 mL的25 g#12539;L-1 胰酶和05 mmol#12539;L-1 EDTA (GIBCO/BRL) 在 37℃孵育20 min. 用 8 mL 完全培养基终止消化.弃去仍贴壁细胞，消化所获细胞（大部分来自克隆集落中心周围细胞）即为MSCs.500 g 离心15 min收集的MS