更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究.doc

　　更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究 ：顾绍庆，顾小海, 陈慧娟， 李继安， 叶亮英， 郑意 【摘要】 　　目的： 探讨更昔洛韦体外抑制人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）的作用方式。方法： 根据病毒复制周期设计3种作用模式来观察更昔洛韦对HCMV的抑制作用：模式Ⅰ将病毒与细胞混合后，再加入药物；模式Ⅱ将药物与细胞混合后，再加入病毒；模式Ⅲ将药物与病毒混合后再加入细胞。通过观察细胞病变效应，用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率，以确定该药物 治疗 指数。结果： 更昔洛韦对人胚成纤维细胞半数中毒浓度(TC50)为1 685.23 mg/L。在模式Ⅰ中，更昔洛韦对HCMV半数抑制浓度(IC50)为35.255 mg/L，治疗指数为47.8；在模式Ⅱ和Ⅲ中，更昔洛韦对HCMV无明显抑制作用。结论: 更昔洛韦对HCMV感染细胞后显示出显著的抑制作用，且随药物浓度的增加其作用逐渐增强，存在明显的量效关系。同时，体外实验显示，更昔洛韦对人胚成纤维细胞感染HCMV无预防作用。 【关键词】 更昔洛韦； 人巨细胞病毒； 细胞病变效应； 噻唑蓝比色法 　　［Abstract］Objective: To study the inhibitory effect of Ganciclovir（GCV） on human cytomegalovirus(HCMV) in vitro. Methods： According to viral replication cycle， three antiviral methods onolayers e hours，it edium containing different served drug. Method Ⅱ, human embryo fibroblast cells edium. Virusdrug mixed medium eans of observing cytopathic effect and adopting MTT colorimetric assay for cell survival rate，their therapeutic index an embryo fibroblast cells g/L. By method Ⅰ，the 50% inhibitory concentrations(IC50) of GCV for HCMV g/L. By methodⅡand Ⅲ，GCV shoentation revealed that GCV can resist HCMV，and the inhibition effect an embryo fibroblast cells′ infection by HCMV in vitro. 　　［Key an cytomegalovirus； cytopathic effect； MTT colorimetry method 　　人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）属疱疹病毒科β亚科，在我国人群中普遍感染，是母婴宫内和产后感染最常见的病原体之一，可引起死胎、胎儿畸形、流产、发育迟缓和肝功能异常等病理损害［1］，是造成儿童先天畸形、神经系统发育迟缓、 听力 和视力障碍、血液系统病变和婴儿肝炎等严重疾病的主要病原体。同时，HCMV感染也是机体免疫功能低下的人群，如器官移植或者AIDS患者并发感染死亡的常见原因之一［2］。 　　更昔洛韦（Ganciclovir，GCV）是目前临床抗HCMV的首选药物，是第一个通过美国FDA认证的抗HCMV药物。但是，在其使用过程中可能存在不同程度的毒副作用甚至潜在的危险性［3］，临床医师和患者对该药物的使用均存在一定的疑虑。本研究根据细胞、病毒和药物之间的相互作用，设计3种作用模式，探索更昔洛韦的最佳作用模式，为临床合理用药提供依据。　　　　　 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞 　　人胚成纤维细胞由安徽医科大学微生物教研室按常规方法制备，并且经PCR法检测，排除其他疱疹病毒感染。实验采用4～12代细胞。细胞生长液用高糖DMEM配制，含10%新生小牛血清，100 kU/L青霉素，100 mg/L链霉素。细胞维持液除新生小牛血清含量为2%外，其余成分同细胞生长液。 　　1.1.2 病毒 　　HCMVAD169 由安徽医科大学微生物教研室提供，按常规增殖至实验需求量，测定半数组织培养感染数量（TCID50）为10-4.67/0.1 ml。 　　1.1.3 药物 　　注射用更昔洛韦购于山东罗欣药业股份有限公司，批号：国药准字冻干粉针，每支50 mg。将更昔洛韦溶于注射用