玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响.doc

　　玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响 ：黄必义，黄仁彬，卢曦，段小群 【摘要】 　　目的 研究玉郎伞多糖(YLS)对肝星状细胞（HSC）氧应激脂质过氧化作用的影响及机制。方法用H2O2诱导肝星状细胞脂质过氧化，测定细胞培养上清液中MDA，SOD水平，MTT法测定肝星状细胞的增殖，LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用，ELISA法测定I型胶原含量。结果YLS （25～200μg/ml）可明显降低培养上清液中MDA含量和I型胶原水平，抑制肝星状细胞的增殖，提高SOD活力，并呈剂量依赖性。结论 YLS对肝星状细胞的增殖及I型胶原的合成具有抑制作用，该作用可能与其抗氧化作用有关。 【关键词】 玉郎伞多糖 肝星状细胞 I型胶原 　　Abstract：ObjectiveTo study the effects and its mechanism of Yulangsan polysaccharide(YLS) on the proliferation and collagen I production of hepatic stellate cell（HSC）induced by oxidative stress. MethodsThe lipid peroxidation of HSC alondialdehyde(MDA) and SOD in cultural supernatant ined by general methods.Cytotoxicity easured by LDH method.The proliferation of hepatic stellate cells easured by MTT method. The content of collagen I easured by ELISA method.ResultsYLS （25～200μg/ml）concentration-dependently decreased the levels of MDA and collagen I and the number of proliferating HSC ，and increased the activity of SOD . ConclusionYLS can inhibit the proliferation and collagen I production of hepatic stellate cell induced by oxidative stress. This might be associated erisco，北京拜尔迪生物公司分装）；I型胶原试剂盒（美国BPB公司）。 　　1.3 仪器 　　CO2恒温培养箱（美国Thermo Forma，Model 311）；TDL80-2B台式离心机（上海安亭 科学 仪器厂）；XD-101倒置显微镜（南京江南光电集团股份有限公司）；相差倒置显微镜（德国Zeiss）；SZX型超净工作台（上海浦东跃欣科学仪器厂）；722s型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）； 450型酶标仪（美国Bio-Rad）。 　　 2 方法 　　2.1 细胞培养及分组将冷冻保存于液氮中的HSC复苏后接种于含10%小牛血清、100 IU/ml青霉素、100 μg/ml链霉素，4 mmol/L谷氨酰胺的RMPI1640培养液中，37℃，5%CO2条件下培养。当细胞呈单层致密状时，0.25%胰蛋白酶消化后传代，24 h换液，72 h再次传代。每次实验均在呈指数生长的细胞中进行。分组：①空白组；②H2O2组；③ H2O2+ YLS 25 μg/ml组；④H2O2+ YLS 50 μg/ml组；⑤ H2O2+YLS 100 μg/ml组；⑥ H2O2+ YLS 200 μg/ml组；⑦ H2O2+VitE 50 μmol/L组。每组6孔，H2O2浓度均为3.0 μmol/L，VitE为阳性对照［4］，各组H2O2均于YLS干预前30 min加入。加入药物后继续培养24 h，然后收集细胞观察各项指标。 　　2.2 MTT法测定细胞增殖 　　将HSC以1×105/ml培养于96孔板，培养48 h，换含药的培养液继续培养24 h，每组6孔，各孔加入20 μl MTT试剂，轻轻混匀，继续37℃培养4 h，吸出全部液体，加200 μl DMSO，微量振荡器上振荡15 min，待溶解完全，于酶标仪570 nm波长比色。 　　2.3 细胞毒性实验［5］LDH比色法检测YLS对HSC-T6的细胞毒性。传一代培养的HSC以5%小牛血清的1640培养液制备为1×105/ml细胞悬液，接种于96孔板，每孔200 μl，至细胞长至近单层后，分组后更换含5%小牛血清终