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高效液相色谱法简介及应用 摘要：综述高效液相色谱法的分析原理和特点，简介高效液相色谱仪的基本构造，评述高效液相色谱法在食品分析中的应用研究进展，并对其应用前景进行了展望。 关键词：高效液相色谱法；食品分析；应用 高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography）又称为高压液相色谱（High Pressure LiquidChromatography）、高速液相色谱（High Speed LiquidChromatography）、高分离度液相色谱（High ResolutionLiquid Chromatography），是20 世纪60 年代末70 年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断地改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段[1]。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。本文简要介绍高效液相色谱法的分析原理和特点，高效液相色谱仪基本知识，重点评述其在食品分析中的应用。 1 高效液相色谱法的分析原理和特点 1.1 高效液相色谱法的分析原理 高效液相色谱法是在经典液相色谱法基础上发展起来的。高效液相色谱法是在高压条件下溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程,它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同溶质得以分离[2]。 1.2 高效液相色谱法的特点 从分离原理上讲，高效液相色谱法和经典液相色谱法没有本质的差别，但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，因而使经典的液相色谱法焕发出新的活力。经过近30 年的发展，现在高效液相色谱法在分析速度、分离效能、检测灵敏度和操作自动化方面，都达到了与气相色谱相媲美的程度，并保持了经典液相色谱法对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多和便于制备色谱的优点。其优点概括如下：采用高效微粒固定相使色谱分离效能大大提高；采用新型高压输液泵使分离时间大大缩短；采用高灵敏度的检测器使仪器的检测灵敏度大大提高；由于HPLC 具有高柱效、流动相可以控制和改善分离过程的特点，故其选择性高。 2 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的主要部件有：贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。其基本的工作流程是：贮液罐中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 2.1 贮液罐 贮液罐的材料应耐腐蚀，可为玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮（PEEK）。容积为0.5 L~2.0 L。对凝胶色谱仪、制备型仪器，其容积应大些。贮液罐放置位置要高于泵体，以便保持一定的输液静压差。在使用过程中贮液罐应密闭，以防溶剂蒸发引起流动相组成的变化，还可防止空气中氧气和二氧化碳重新溶解于已脱气的流动相中。 2.2 高压输液泵 高压输液泵可分为恒压泵和恒流泵。对高压输液泵的要求是。 1）泵体材料能耐化学腐蚀。通常采用普通耐酸不锈钢或优质耐酸不锈钢。 2）能在高压下连续工作。通常要求耐压40MPa/cm~50MPa/cm 能在8h~24h连续工作。 3）输出流量范围宽。 4）输出流量稳定，重复性高。 2.3 色谱柱 色谱柱包括柱管和固定相两部分。柱壁材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内壁光滑的聚合材料的其它金属。一般色谱柱长5 cm~30 cm，内径为4 mm~5 mm，凝胶色谱柱内径为3 mm~12 mm，制备色谱柱内径较大，可达25 mm 以上。 2.4 检测器 高效液相色谱法中的检测器主要用来监视经色谱柱分离后的组分随淋洗液流出的浓度变化，所描记的图形用于进行定性和定量分析，因此，要求检测器应该具有灵敏度高、重复性好、线性范围宽、适应范围广、对流量和温度的变化不敏感等特性。常用的检测器为紫外吸收检测器（UVD）、折光指数检测器（RID）、电导检测器（ECD）和荧光检测器（FD）。在高效液相色谱中没有通用检测器，实际应用时按需要和结合各种检测器的特点进行选择应用。 3 高效液相色谱法在食品分析中的应用 3.1 在乳品分析中的应用 乳及乳制品的质量评价比较复杂，包括营养成分及含量、乳品的风味物质、药物残留和毒物种类及含量等多个方面，HPLC 法可用于乳品中多种质量控制指标的检测。乳及乳制品中富含糖、脂、蛋白质、维生素等营养以及强化的营养物质，HPLC 技术几乎可用于各种营养成分的检测。在低分子糖类的测