高效液相色谱测定麦苗中阿魏酸含量.doc

高效液相色谱测定含量采用RP-HPLC法对中的含量测定，方法简便、快速、重现性好，适用于中的定量分析。 The determination of ferulic acid in wheat seeding by RP-HPLC Abstract: The determination the content of ferulic acid in wheat seeding by RP-HPLC, combined with the external standard method to determine the standard curve drawing, which is being tested samples of ferulic acid content, and compared the differences in ferulic acid content of varieties. This method is simple, rapid and reproducible, and is suitable for the quantitative analysis on ferulic acid in wheat seeding. Keywords: ferulic acid, wheat seeding, RP-HPLC 阿魏酸是植物中普遍存在的一种有机酚酸，也是小麦苗皮中含量最高的酚酸(0.4％～1.0％)，是木质素合成的中间产物，其化学名为：4一羟基一3一甲氧基肉桂酸(4-hydroxy一3一methoxyphen1)，在麦苗中主要与细胞壁多糖和木质素交联构成细胞壁的一部分,是桂皮酸的衍生物之一，有顺式和反式2种【1】。 目前关于阿魏酸的分析方法文献报道较多，如薄层扫描法、分光光度法、高效毛细管电泳法和高效液相色谱法等【2】，本文采用高效液相色谱法测定了麦苗中阿魏酸的含量，结果表明，该方法色谱分离效果良好、精密度高、重现性好、回收率高。 1、实验仪器与试剂： 1.1仪器：高效液相色谱仪；电子天平；纯水仪；超声波清洗机等。试剂：为色谱纯水为纯水、乙醇以及盐酸为分析纯等；对照品(sigma公司提供)。 样品前处理 g烘干至恒重的小麦籽粒用粉碎机粉碎后，浸入100mL蒸馏水中加淀粉酶0.2g，在55℃下，用4%NaOH调pH=8.0，于恒温水浴锅水浴1h（每10min定期振荡）,再用胃蛋白酶0.1g在37℃下，用6 mol·L-1HCl溶液调pH =2，于恒温气浴摇床中再次震荡搅拌1h。之后再用四层纱布过滤，取滤渣于105℃下烘干2h灭酶，得干沉淀，再次称重（记录实际称量质量）。 干沉淀用体积比2∶1的碱醇（质量分数4%的NaOH、无水乙醇）溶液按料液比1∶12(w/v)浸润，在40℃下加入0.3g无水Na2SO3,超声0.5h。用6mol·L-1HCL溶液调节pH =2，6000 rpm·min-1离心15min，去残渣。上清液于50℃旋转蒸发出其中的乙醇。将余液用流动相定容至50mL，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过即可。 2.2实验操作 2.2.1开机、关机：a.平衡柱b.平衡检测器c.色谱柱保存d.PC→泵→柱箱→检测器 2.2.2流动相的配制：称量→溶解→调pH→混合→过滤→脱气 2.2.3过滤：采用溶剂过滤器 滤膜规格：0.22um,0.45um 滤膜类型：有机系（F）：过滤含有机溶剂的流动相 2.2.4脱气方法：a.超声波b.充He c.抽真空d.在线 2.2.5 pH：a.分离最佳pH b.色谱柱pH适用范围 2.2.6六通阀进样操作： 取样→load→插针→注入样品→inject→（1min后）色谱条件 um，phenomenex)； 流动相：甲醇-水-冰乙酸（30∶69∶1），pH=3；柱温30℃；流速1.0 mL·min-1，检测波长320nm，进样量5ul。 2.4制作标准曲线 配制浓度为13.92ug/ml的标准样品，分别以1、2.5、5、7.5、10、15ul标准的回归方程ul进样，分别记录其保留时间和峰面积。利用制作好的标准曲线计算各样品中阿魏酸的含量。进样量(ug):浓度×体积，y=ax+b（y：峰面积A ，x：进样量），样品浓度=进样量/5ul。 2.6实验结果 2.6.1标准样品： 表1 进样体积(ul) 保留时间(min) 进样量(ug) 峰面积 2.5 8.015 34.80 179097.3 5 7.973 69.60 301510.1 7.5 7.907 104.4 503900.0 10 7.898 139.2 743989.5 15 7.840 20