实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应.doc

实验 蛋白质及氨基酸的呈色反应 aOH溶液 (3)1%CuSO4溶液 (4)蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用。 3、操作 （1）取少许结晶尿素放在干燥试管，微火加热，则尿素开始熔化，并形成双缩脲，释放的氨可用湿润的红色石蕊试纸鉴定。待熔融的尿素开始硬化，试管内有白色固体出现，停止加热，让试管缓慢冷却。然后加10% NaOH溶液 1 ml和1% CuSO4 2~3滴，混匀后观察颜色的变化。 （2）另取一试管，加蛋白质溶液 1ml、10% NaOH溶液2ml及1% CuSO4 2~3滴，振荡后将出现的紫红色与双缩脲反应所产生的颜色相对比。 茚三酮反应 1、实验原理 除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮作用生成黄色物质外，所有α-氨基酸与茚三酮发生反应 生成紫红色物质，最终形成蓝紫色化合物。1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反应而显色。反应的适宜pH为5~7。此反应目前广泛地应用于氨基酸定量测定。 2、试剂 蛋白质溶液 （同前）；0.5% 甘氨酸；0.5%茚三酮水溶液 3、操作 取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液各1 ml，再各加0.5 ml 0.1%茚三酮水溶 液，混匀，在沸水浴加热2~3分钟，观察颜色变化。 蛋白黄色反应 1、实验原理 蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等，这类蛋白质可 被浓硝酸硝化生成黄色的硝基苯的衍生物。该物质在酸性环境中呈黄色，在碱性环境中转变为橙黄色的硝醌酸钠。绝大多数蛋白质都含有芳香族氨基酸，因此都有黄色反应。皮肤、毛发、指甲等遇浓HNO3变黄即发生此类黄色反应结果。 2、试剂 (1)蛋白质溶液（同前）；(2)头发；(3)指甲屑；(4)0.5%苯酚溶液；(5)0.3%酪氨酸溶液；(6)10%NaOH溶液；(7)浓硝酸（ρ=1.42克/毫升） 3、操作 取5支试管编号后分别按下表-1所示加入试剂，观察各管出现的现象，若有反应慢者 可放置微火（或水浴中）加热，待各管均先后出现黄色后，于室温逐滴加入10%NaOH溶液直至碱性，观察颜色变化。 表1 试验编号 管 号 1 2 3 4 5 材料加入 蛋白质溶液（4滴） 指甲屑 （少许） 头发 （少许） 苯酚 （4滴） 酪氨酸 （4滴） 浓硝酸 2滴 2 ml 2 ml 4滴 2滴 现 象 注意：向蛋白质溶液中加浓硝酸时，所出现的白色沉淀是强酸使蛋白质发生变性所致。 乙醛酸反应 1、实验原理 含有吲哚基的色氨酸在浓硫酸存在下与乙醛酸（CHOCOOH）缩合，形成与靛蓝相似的 物质。此反应机理尚不清楚，可能是由一分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合而成的。含有色氨酸的蛋白质也有此反应。 2、试剂 (1)蛋白质溶液（同前）。 (2)0.03%色氨酸溶液。 (3)冰醋酸（一般含有乙醛酸杂质，故可用冰醋酸代替乙醛酸）。 (4)浓硫酸（分析纯）。 3、操作： 取2支试管，分别加入蛋白质溶液及色氨酸各2滴，再加浓冰醋酸约1~2毫升，混匀，倾斜试管慢慢地沿管各加浓硫酸1毫升，使之两相重叠，静置5分钟后则两相界面处出现紫红色环，若效果不明显可在水浴加热。 偶氮反应 1、实验原理 偶氮化合物与酚核或咪唑环结合产生有色物质，酪氨酸和组氨酸与之反应则应产物分别为橙红色和樱红色。含有酪氨酸和组氨酸的蛋白质也有此反应。应当指出，组胺、酪胺、肾上腺素和胆色素分子也能发生此反应而显色。 2、试剂： (1)蛋白质溶液（同前）；(2)0.3%组氨酸溶液；(3)0.3%酪氨酸溶液；(4)20%NaOH溶液； (5)重氮试剂 溶液A：5克亚硝酸钠溶于1000毫升水中。 溶液B：溶解5克ɑ-氨基苯磺酸于1000毫升水中，溶解后再加入5毫升浓硫酸。A、B液分别存在密闭瓶中，用时以等体积混合。 3、操作： 取3支试管分别加入0.3%组氨酸、酪氨酸、蛋白质溶液，各4~5滴，再分别加重氮试剂A、B各10滴，振摇，混匀，取后向3支试管分别加入20%NaOH溶液2~3滴，观察各试管中有色物质的生成，若水浴加热效果更明显。 （六）、醋酸铅反应 1、实验原理 多数蛋白质分子中常有含硫的氨基酸，如半胱氨酸和胱氨酸，含硫蛋白质在强碱作用下可分解产生硫化钠。硫化钠与醋酸铅反应生成黑色的硫化铅沉淀，若加入浓盐酸则有硫化氢气体产生。 2、试剂 (1)未稀释的鸡蛋清。 (2)10%的NaOH溶液 (3)1.5%Pb(Ac)2溶液（醋酸铅溶液） (4)浓盐酸 (5)醋酸铅试纸(将滤纸条浸入醋酸铅溶液中，湿透后取出，100℃烘干即可) 3、操作： 向试管中先加入1.5% Pb(Ac)2溶液约1毫升，再慢慢滴加10%的NaOH溶液，边加边振摇，直到产生的沉淀溶解为止。此时再向试管内加蛋白质溶液5~6滴，混匀。置酒精灯上加热1分钟，溶液变黑，