乙酰胺对念珠藻No.stoc106生长周期的影响.docVIP

　　乙酰胺对念珠藻No.stoc106生长周期的影响 景 江，吴菊珍，周 筝，彭明江，陈章达 （成都工业学院， 成都 ６１００００） 摘要：研究了不同浓度的乙酰胺对念珠藻１０６（Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ． １０６）在对数期、稳定期和生长末期的影响。研究结果表明加入一定浓度的乙酰胺对蓝藻生长有一定的刺激作用。测定叶绿素ａ、藻胆蛋白含量、ＳＯＤ含量、ＡＴＰ含量等生长代谢指标，表明加入浓度为１、２和５ ｍｇ／ｍＬ的乙酰胺不同程度地延缓了念珠藻Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ． １０６的衰亡，浓度５ ｍｇ／ｍＬ的乙酰胺增加了念珠藻Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ． １０６在生长对数期的时间。 .. 关键词：乙酰胺；叶绿素ａ；藻蓝蛋白；念珠藻１０６（Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．１０６） 中图分类号：Ｑ９４５ 文献标识码：A ：0439－８114（２０15）07－1699-03 DOI:10.14088/j.ki.issn0439-8114.2015.07.043 蓝藻是水生生态系统中的重要组成部分，对整个水生态系统的平衡和稳定起着重要的作用。蓝藻的大量生长恶化水体的通风及光照条件、抑制水体中浮游生物有益种类的生长繁殖、阻碍水中植物的光合作用，挤占其他水生生物的生存空间［１］。蓝藻生命力强，越冬期生活在湖泊的底泥中，遇到适合其生长的外部环境条件如光照、温度、溶解氧（ＤＯ）等时，再次复苏［２］。念珠藻作为蓝藻一个代表种，属于水华爆发中的常见藻种。 近年来，有许多关于湖泊富营养化与蓝藻爆发相互作用的报道，但就某类污染物对蓝藻生长影响的具体研究较少。前期试验发现工业废水中的酰胺类物质可能是蓝藻爆发与疯长的原因之一。乙酰胺（ａｃｅｔａｍｉｄｅ）别名醋酰胺，是有机氟杀虫农药氟乙酰胺中毒的解毒药，可用作对水溶解度低的一些物质在水中溶解时的增溶剂，如纤维工业中常用乙酰胺作染料的溶剂和增溶剂。因此随着工业废水的排放，每年有大量的乙酰胺进入湖泊、河流等自然水体中。本研究就乙酰胺对念珠藻１０６（Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．１０６）生长周期的影响进行了研究，对比不同浓度的乙酰胺对念珠藻１０６（Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．１０６）在对数期、稳定期和生长末期的影响。 １ 材料与方法 １．１ 试验材料 藻种：念珠藻１０６（Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．１０６）由中国科学院典型培养物保藏委员会淡水藻种库（ＦＡＣＨＢ）提供。ＢＧ－１１培养基，用以培养Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．１０６。培养温度为２５ ℃， 可见光照度２ ０００ ｌｘ，ｐＨ ６．８，培养至对数生长期。 乙酰胺：由成都科龙化工试剂公司提供（分析纯ＡＲ）。 其余所用试剂均为分析纯（ＡＲ）。 试验仪器：ＬＲＨ-２５０型生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）、可见分光光度计７２１Ｇ（上海精密科学仪器有限公司）、ＪＹ９２-Ⅱ型超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技有限公司）、高速台式离心机。 １．２ 乙酰胺对蓝藻生长周期的影响试验 分别将对数期的念珠藻１０６（Ｎｏｓｔｏｃ ｓｐ．１０６）接种于４个１ ０００ ｍＬ锥形瓶中，藻液接满１ ０００ ｍＬ。１号为空白对照试验，２号加入乙酰胺浓度为１ ｍｇ／ｍＬ，３号加入乙酰胺浓度为２ ｍｇ／ｍＬ，４号加入乙酰胺浓度为５ ｍｇ／ｍＬ。每天光照１０ h、曝气２４ h、磁搅拌力器搅拌，试验温度２５ ℃， ｐＨ ６．８，每隔２４ ｈ定点取样分析。 １．３ 叶绿素ａ（Ｃｈｌ ａ）的测定 每隔２４ ｈ定时取５ ｍＬ（定为Ｖ１）藻液于１０ ｍＬ离心管中，在超声破碎仪上破碎３０ ｓ，工作时间１ ｓ，间隔２ ｓ，然后在样品中加入２０ μＬ １％（质量分数）的ＭｇＣＯ３溶液，于８ ０００ ｒ／ｍｉｎ下离心１５ ｍｉｎ，弃去上清液［3］。在沉淀中加入３ ｍＬ丙酮溶液，于４ ℃冰箱中过夜萃取１８～２４ ｈ，于７ ０００ ｒ／ｍｉｎ下离心１０ ｍｉｎ，取上清液于７ ｍＬ离心管中，分别测定７５0，６６３，６４５ 和６３０ ｎｍ的吸光度（OD），取７ ｍＬ离心管中上清液的体积为Ｖ２，利用下式计算Ｃｈｌ ａ （ｍｇ／ｍＬ）： 叶绿素ａ含量＝［１１．６４×（ＯＤ６６３ ｎｍ－ＯＤ７５０ ｎｍ）－２．１６×（ＯＤ６４５ ｎｍ－ＯＤ７５０ ｎｍ）＋０．１（ＯＤ６３０ ｎｍ－ＯＤ７５０ ｎｍ）］Ｖ２／Ｖ１ １．４ 藻蓝蛋白（Ｃ－ＰＣ）含量的测定 参照Ｐａｄｕｌａ的方法［4］，在分光光度计下测量藻蓝蛋白在６２０和６５０ ｎｍ的ＯＤ，用以下公式计算Ｃ－ＰＣ（ｍｇ／Ｌ）： Ｃ－ＰＣ＝（１６６×ＯＤ６２０ ｎｍ）－（１０８×ＯＤ６５０ ｎｍ） １．５ 藻密度的吸光度值 超声破碎，用分光光度计（７２１Ｇ）在６８０ ｎｍ下测量藻液的吸光度值［5］。 １．６ 超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的测定 于２５ ℃，在４．５ ｍＬ ５０ ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｋ２ＨＰＯ４－Ｋ