α硫辛酸对染铅幼年大鼠骨代谢的影响.docVIP

　　α硫辛酸对染铅幼年大鼠骨代谢的影响 ：裴丹，郑德宇，单伟，秦书俭 【摘要】 目的 探讨α硫辛酸对染铅大鼠骨代谢的影响。方法 将31只SD大鼠随机分为2组，空白对照组8只和铅染毒组(230mg/L的醋酸铅灌胃)23只，40d后各组取3只大鼠测血铅和骨铅，将已染铅大鼠随机分为4组，即铅对照组、3个α硫辛酸 治疗 组[30、60、100mg/(kg·d)]每组5只。α硫辛酸治疗80d后处死动物，测定血铅、骨铅，骨钙素放免分析法测含量，碱性磷酸酶免疫组化法检测表达。结果 ①各α硫辛酸治疗组大鼠血铅、骨铅水平均低于铅对照组，差异有统计学意义(Plt;0.05)。②α硫辛酸100mg治疗组大鼠骨钙素含量、碱性磷酸酶表达与铅对照组比较，差异有统计学意义(Plt;0.05)。结论 α硫辛酸能够减轻铅对骨代谢的毒性作用。 【关键词】 α硫辛酸;铅;骨;骨钙素;碱性磷酸酶 　　ABSTRACT: Objective To determine the effects of αlipoic acid on bone metabolism in leadpoisoned rats.Methods Totally 31 SD rats ly divided into tg/L). After 40 days, 3 rats from each group easurement of lead in the blood and bone. The rats in lead group ly divided into four groups: lead control group and three lead groups g/(kg·d)], ent (80d), the rats ples of and bone munoassay and alkaline phosphatase expression munohistochemistry staining.Results ① Blood and bone lead contents in each αlipoic treatment group ent g, osteocalcin content and alkaline phosphatase expression those in lead control group (Plt;0.05).Conclusion αlipoic acid can alleviate lead toxicity in bone metabolism. 　　KEY 6 Olympus倒置相差显微镜。②主要试剂：醋酸铅(沈阳市试剂二厂)，α硫辛酸(Sigma公司)，骨钙素放免试剂盒(解放军总 医院 科技开发中心)，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)免疫组化试剂盒(武汉博士德生物公司)。 　　1.2 动物模型及分组 健康断乳SD大鼠31只，体重(100±6.23)g，雌雄不限，购自辽宁医学院实验动物中心，观察3d无异常后进行实验。大鼠随机分为2组，分别为空白对照组(A组，8只，1～40d蒸馏水灌胃)，实验组：铅染毒组(23只，1～40d 230mg/L的醋酸铅灌胃)，40d后各组取3只大鼠测全血铅和骨铅。将已染铅大鼠随机分为4组，每组5只，即无措施铅对照组(B)(41～120d生理盐水腹腔注射)、LA治疗组[41～120d分别用30(C)、60(D)、100(E)mg/(kg·d)的α硫辛酸腹腔注射]。每天定时注射，期间各组大鼠均饲常规饲料、饮蒸馏水。第121天处死动物，颈动脉取血，取大鼠两侧股骨，-80℃冰冻待用。 　　1.3 血铅、骨铅含量的测定 取血样0.1mL，加稀释液 　　0.9mL摇匀后待测。精确称量骨样，放入聚四氟乙烯容器中。加1mL纯硝酸，2mL 300mL/L的过氧化氢放入消化罐内，于120℃消化2h，取出消化罐，将消化液移出。取消化液0.1mL，加去离子水0.9mL稀释，摇匀后待测。取出预处理后的样品，用TAS986原子吸收分光光度计石墨炉法检测。波长283.3nm，采用铅标准液做出标准曲线，再测待测样本。 　　1.4 碱性磷酸酶的免疫组织化学染色 取骨干组织包块，作5μm厚切片。将石蜡切片脱蜡至水，30mL/L H2O2室温孵育，以消除内源性过氧化物酶，经pH 6.0的枸橼酸缓冲液中行抗原热修复，50mL/L正常山羊血清封闭后加入1∶100稀释的一抗(碱性磷酸酶)，4℃过夜。滴加生物素标记的二抗37℃孵育30min，滴加ABC试剂37℃孵育30min后DAB显色，常规脱水、透明、封片。以上各步骤均用PBS冲洗，同时用PBS代替一抗设置阴性对照。棕黄色颗粒代表阳性结果。