用Chiral—AGP拆分手性药物的影响因素.pdfVIP

Central South Pharmacy．February 2008，Vo1．6 No．1 中南药学2008年2月第6卷第1期 用Chiral—AGP拆分手性药物的影响因素 谢志红 ，李焕德 (1_广州医学院第二附属医院，广州 510260；2．湘雅二医院临床药学研究室，长沙 410011) 关键词：手性拆分，酸性糖蛋白柱 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1672—2981(2007)06 0076—04 手性是自然界的一种普遍现象，构成生物体的基本物质 少含有一个氢键结合点；③芳环基团和氢键结合点问的间隔 如氨基酸、糖类和蛋白质等都是手性分子。蛋白质的四级结 不得超过 3个原子。 构与其生理活性有关，天然的氨基酸都是L『构型的，而天 然的糖类则大多为 构型。在药物化学领域，在现有的一 万多种合成的药物分子中含有手性的约占4o 。化合物对 生物体的作用取决于它们与生物体内的特定部位的结合情 况，而体内的这些结合点常常是具有手性特征结构的蛋白 质、氨基酸等，所以这种结合是在三维空间的作用，从而导 致对映体分子在生物体内经常表现出不同的生理特征。这种 不同表现在：药物分子在体内的吸收、分布和清除存在差 异，也可表现为产生不同的药效l1 7。手性固定相法的应用范 围极其广泛，几乎在所有的色谱拆分手段中都可以用到，常 图1 d1一AGP结构图 用的手性固定相有：刷型手性固定相、淀粉基纤维素类手性 Fig1 Structure of d1一AGP 固定相、环糊精类手性固定相、蛋白质类手性固定相等。目 蛋白质的空间构型、极性基团和疏水效应等在手性识别 前，用于HPLC手性拆分分析的蛋白质手性固定相主要有： 过程中起着重要的作用，所以在键合蛋白质于填料上时，应 人a 一酸性糖蛋白 (a 一AGP)、人血清白蛋白 (HSA)、牛血 在适当的缓冲盐液、pH值、盐度等温和条件下进行，以使 清白蛋白 (BSA)、卵黏蛋白 (OVM)和纤维素二糖水解酶 蛋白质的活性结构不发生变性。 (CBH)。本文综述了近几年国内外利用手性糖蛋白柱 2 缓冲盐pH值离子强度对手性拆分的影响 (Chiral-AGP)拆分各种药物的文献，总结了有机改性剂种 流动相的pH值对拆分选择性的影响显著。AGP应用 类和浓度、缓冲盐pH值和浓度以及流速、柱温对手性药物 的pH值范围为3～7，虽然有些药物其最佳的分离pH值 拆分的影响。 7，但当其使用pH值7时，柱的稳定性下降，从而缩短 1 m-AGP结构及其应用 柱子使用寿命。AGP等电点为2．7，因此在其应用pH值范 将a 一酸性糖蛋白 (AGP)为固定相是自1983年 Her— 围内蛋白分子结构中的氨基酸呈离子型状态，该离子结构提 mansson制备了第一代硅胶键合AGP-CSP(Enantiopak)开 供了手性作用位点，利用手性药物对映体与这些作用位点问 始的，此AGP-CSP适合于拆分手性阳离子和阴离子药物， 产生不同的氢键结合效应、疏水效应、静电作用等而达到 而在表面改性的硅胶上通作交链共价键合方法制备第2代 拆分 。 AGP．一CSP(Chiral—AGP)显著提高了稳定性和改善了对映 虽然蛋白质的对映异构体识别机制并非十分清楚。一般 体选择性。 认为，对酸J生物质而言，其分离度随pH值升高而下降，这 a 一AGP为含有181个氨基酸残基和4O个唾液酸残基的 可能是与AGP带电部位相结合，则其与固定相作用机制属 多肽，具有酸性，等电点为2．7，结构中含有2个二硫键桥， 于离子交换，而带电基团数目随pH而变化，因而影响溶质 所以比较稳定，其结构如图1所示。a 一AGP手性蛋白柱是 与固定相作用，从而显示出阴离子随pH值降低而与固定相 一 种反相柱，可用来分离很广范围的手性化合物，例如：胺 作用增强，其保留值及选择性增加。对于酸性药物的手性拆 类化合物 (伯胺、仲胺、叔胺和季胺等)，酸 (强