第三四章酶的分离纯化和催化反应类型课件.pptVIP

Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 Contents of chapter 3 酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过程。也称为酶的抽提。 酶提取时首先应根据酶的结构和溶解性质，选择适当的溶剂。一般说来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性的有机溶剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。 酶都能溶解于水，通常可用水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取，有些酶与脂质结合或含有较多的非极性基团，则可用有机溶剂提取。 3.4 酶的分离方法 4、层析分离 3.5 酶的组合分离纯化策略 3.6 酶的浓缩、干燥与结晶 第四章 生物催化反应类型 生物催化反应的选择性 1、化学选择性 化学选择性是指在一定的反应条件下，优先对底物分子中某一功能基团起化学反应。 化学催化反应中，硼氢化钠（NaBH4）可将酮酯分子中的酮基还原胃仲醇，而对酯基中羰基则不起反应，催化剂硼氢化钠能实现化学选择，还原产物仲醇是消旋体。 2、区域选择性 区域选择性是指在一定的反应条件下，优先选择与分子内不同位置的某一相同功能基团起化学反应，生成某一中异构体，而另一种异构体则很少生成。 酶反应几乎具有完全的区域选择性。酶可以选择性水解底物分子中不同位置的酯基。不同的酶起选择性不同。  3、立体选择性 立体异构体是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，它可分为顺反异构体，对映异构体和构象异构体3种，也可分为对映异构体和非对映异构体两大类。 对映选择性是指反应优先生成一对对映异构体中的某一种。或者是反应优先消耗对映异构体反应物中的某一种对映体。 酶催化反应具有显著的立体选择性。 生物催化剂的有机化学反应 一、生物催化反应与有机化学合成 通常用于生物催化反应的酶制剂可分为纯酶、粗酶或含有某种酶的完整微生物细胞。酶分子的状态可以是游离酶，也可是固定化状态，为了提高酶制剂的稳定性和催化活性，也可以对酶制剂本身进行修饰和改进。 酶几乎能催化各种类型的化学反应。 二、生物催化的水解反应 水解酶的种类。例如：酯酶，肪脂酶，蛋白酶，糖苷链水解酶（淀粉酶、纤维素酶和溶菌酶）等，此类酶对底物性不太严格，故对有机合成来说是一类特别有用的酶。 生物催化水解反应可以广泛用于手性化合物的拆分，水解酶的催化下，在低水活度的溶剂体系中可以进行酯或酰胺的合成反应。 可广泛应用于酯、内酯、苷、酰胺和内酰胺等化合物的水解，且水解作用具有对映体有选择性。 · 生物催化的酯水解反应 许多蛋白水解酶能选择性的水解由L－氨基酸形成的酯，对D－氨基酸所形成的酯则不起催化作用，可以将消旋化的氨基酸酯进行酶法拆分。 ·生物催化的肽链水解反应 多肽链的完全水解一般是应用酸催化水解法。但为了从多肽链中得到某一个肽链片断，可应用肽链内切酶选择性水解多肽链，同时亦可用肽链外切酶选择性的将多肽链C－端氨基酸残基酸或残基水解下来。 ·生物催化的糖苷链水解反应 ⑴淀粉的酶水解 直链淀粉是由α－D－葡萄糖分子通过α－（1、4）糖苷链连接而成的链状化合物，支链淀粉是由多个（1，4）－糖苷链直链通过（1，6）－糖苷链连接而成的树枝状化合物。 淀粉水解酶中重要的是直链淀粉水解酶，主要包括α－淀粉酶、β－淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和α－（1，6）－糖苷酶4种。各种酶的水解位点如下图。 ⑵蔗糖的水解酶 蔗糖是二糖的典型代表。应用α－葡萄糖苷酶可以将蔗糖水解成葡萄糖和水果糖。 ⑶纤维素的酶水解 纤维素是由β－D－葡萄糖通过β－（1，4）－糖苷链连接而成的长链大分子。纤维素酶可特异性的水解β－（1，4）－糖苷链，将纤维素水解成葡萄糖。 生物催化的酰胺水解反应 生物催化酰胺水解在β－内酰胺环类抗生素制药工作中非常重要。 例如：将青霉素和头孢菌素水解获得合成各种新青霉素和头孢霉素的重要母核6－氨基青霉烷酸（6－APA）和7－氨基头孢烷酸（7－ACA）和7－氨基乙酰氧基头孢烷酸（7－ADCA），而不引起β －内酰胺环的开裂。 三、生物催化的氧化还原反应 1、生物催化过程氧化还原酶和氧化还原反应 ·酶催化氧化还原反应特点： ①整个反应是分布进行的，每步均由相应的酶催化； ②反应过程中碳原子和氢原子的氧化、电子的迁移和质子的传递等，可以是非同步进行； ③反应过程中能量的释放和吸收也是分布进行的。 ·氧化还原酶 氧化还原反应酶在组成上比水解酶要复杂得多，氧化还原酶由酶蛋白和辅因子组成。常见的辅酶因子包括：辅酶，如NAD+，NADP+，FAD，ＦＭＮ等，金属离子，如Ｆｅ，Ｃｕ。