紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量.docVIP

紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量摘要：目的：建立广金钱草中总黄酮的含量测定方法。方法：采用紫外分光光度法，以芹菜素为对照品，测定波长272nm。结果：芹菜素在2.144～10.72μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系，r=O.9997(n=5)回收率为97.3％，RSD为1.8％(n=5)。结论：此方法操作简单，精密度、稳定性和重复性良好，有助于广金钱草药材的质量控制。 关键词：广金钱草；芹菜素；总黄酮；紫外分光光度法 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 　文章编号：1673-7717(2007)12-2636-02 广金钱草为豆科植物广金钱草Desmodiumscyracifolium(Osb.)Merr.的干燥地上部分。始载于《岭南草药志》，为常用中药，主产于我国广东、广西、四川、云南、江西、福建、海南等地。具有清热除湿、利尿通淋之功效。用于治疗各种淋证、水肿等疾病历史悠久。含黄酮类，生物碱类，皂苷类，酚类等成分。药理研究证明：广金钱草有预防草酸钙结石形成和复发的作用。广金钱草中的三萜皂苷类和黄酮苷类化合物有预防乙二醇和维生索D3造成的大鼠草酸钙尿路结石形成的效果。广金钱草在体内能保护肾组织细胞，对草酸钙晶体形成有明显抑制作用。广金钱草总黄酮对心脑血管病理模型具有很好的改善作用。另外广金钱草还有抗炎镇痛作用，改善记忆和脑保护作用，利胆作用等。《中华人民共和国药典》只收载了广金钱草中黄酮，生物碱的检查方法，为其制定质量可控的标准带来了困难。目前广金钱草中含有的黄酮类化合物已知的有5种：异牡荆苷、vicenin-1、vicenin-2、夏佛塔苷和异荭草苷，均属于黄酮类衍生物。本实验首次采用异牡荆苷、vicenln-1、vi-eenin-2和夏佛塔苷共有的母核芹菜素为对照品，采用紫外分光光度法，测定了广金钱草中总黄酮的含量，为广金钱草原药材的质量控制提供了依据。 1.仪器与试药 UV-3050型紫外可见分光光度计(日立仪器有限公司)，AR2140电子分析天平，AS3120A超声波清洗器。芹菜素对照品(北京显通时代科技有限公司)，含量98％以上。所用试剂均为分析纯。广金钱草药材购于广东、广西等地不同的药房，经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为豆科山蚂蝗属植物广金钱草Desmodiumayracifolium(Osb.)Merr.的干燥地上部分。 2.方法与结果 2.1对照品溶液的制备 精密称取芹菜素对照品5.36mg，置于25mL的量瓶中，加60％甲醇使之溶解后稀释至25mL，摇匀，备用。 2.2供试品溶液的制备　取本品粉末(过二号筛)1g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加60％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液0.1mL置10mL量瓶中用60％的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.3测定波长的选择　对照品溶液和供试品溶液在200～400m进行扫描，发现均在272nm和339nm附近有最大吸收峰，但波长272nm处的灵敏度比波长339nm波长出的灵敏度大，故选择测定波长272nm。 2.4线性关系考察　精密吸取上述对照品溶液1、2、3.4、5mL，分别置于10mL量瓶中，加60％的甲醇稀释至刻度，摇匀，以60％甲醇为空白对照，于272nm测定吸光度，以芹菜素溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程Y=68.986X-0.0193，r=O.9997(n=5)。结果表明芹菜素在2.144～10.72μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。 2.5精密度试验　分别精密吸取同一供试品溶液，测定吸收度，RSD％为0.3％，表明仪器精密度良好。 2.6稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液，于室温放置0、30、60,90、120min测定吸光度，其吸光度的RSD％为1.5％，说样品在2h内稳定。 2.7重复性试验　取本品同一批样品5份，按“2.3”项平行制备供试品溶液，测定吸收度，并计算含量，其含量的RSD％为1.5％，结果表明本方法重复性好。 　　2.8加样回收率试验　精密称取已知含量的广金钱草药材(总黄酮含量为12.79mg/g)5份，各0.5g，精密称定。置25mL量瓶中，分别精密加入浓度为2.5831mg/mL芹菜素对照品溶液3.0mL于量瓶中按“2.3”下测定，计算回收率，结果见表1。平均回收率97.3％，RSD=1.8％(n=5)。 2.9样品测定　按“2.3”项下制备供试品溶液，对11批来源不同的广金钱草进行了总黄酮的含量测定，结果见表2。 3.讨论 3.1测定方法的选择　黄